2002 Fiscal Year Annual Research Report

カニクイザルES細胞への遺伝子導入法の開発とその移植応用をめざす研究

Research Project

Project/Area Number	13671080
Research Institution	Jichi Medical School
Principal Investigator	花園豊自治医科大学, 医学部, 講師 (70251246)
Keywords	カニクイザルES細胞 / レンチウイルスベクター / SIVベクター / センダイウイルスベクター / NOD / SCID / 胎仔移植 / カニクイザル / ヒツジ
Research Abstract	1.レンチウイルスベクターによる遺伝子導入サル免疫不全ウイルス(SIV)ベクターを用いる遺伝子導入法の改良を行った。 (1)SIVベクターの改良:ある特殊な塩基配列(cPPTとWPRE)の付加によって、導入遣伝子発現の増強が認められた。 (2)プロモーターの検討:一般的な汎用プロモーター(CMV、EF1α、PGK)の内、EF1αプロモーターがカニクイザルES細胞において最も高い遺伝子発現をもたらした。 2.センダイウイルスベクターによる遺伝子導入センダイウイルスベクターによってカニクイザルES細胞へ効率よく遺伝子を導入できた。同ベクターによってGFP(green fluorescent protein)遺伝子を導入したES細胞の分化能を検討した。in vitroでGFPを発現する血液およぴ神経細胞への分化に成功した。また、NOD/SCIDマウスに移植したところGFPを発現するテラトーマを形成した。よってセンダイウイルスベクターはカニクイザルES細胞の分化能を損なわない。また、細胞の継代や分化に伴う導入遺伝子の発現衰弱は認められなかった。 3.カニクイザルES細胞の移植系の確立カニクイザルES細胞の同種移植の系として、同細胞をカニクイザル胎仔4頭へ移植した。2頭は腹腔内へ、2頭は肝臓内へ移植した。いずれも妊娠経過は順調であった。未分化ES細胞を移植したサル胎仔1頭では移植3ヶ月後にテラトーマの発生を確認した。ES細胞移植応用にあたっては未分化ES細胞の除去が重要である。カニクイザルES細胞の異種移植の系として、同細胞をヒツジ胎仔(9頭)へ移植した。当初、子宮壁に切開を加えて移植手術を行ったが流産率が高かったため(約50%)、エコーガイド化で移植手術を行ったところ流産は大幅に減少した。この系はES細胞の増殖や分化を調べるin vivoアッセイ系となりうる。

Research Products
(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Hanazono, Y.et al.: "Genetic manipulation of primate embryonic and hematopoietic stem cells with simian lentivirus vectors"Trends in Cardiovascular Medicine. (発表予定). (2003)
[Publications] Kume, A.et al.: "In vivo expansion of transduced murine hematopoietic cells with a selective amplifier gene"J. Gene Med.. (発表予定). (2003)
[Publications] Ageyama, N. et al.: "Safe and efficient methods for cynomolgus monkey autologous hematopoietic stem cell transplantation for biomedical researches"Comp. Med.. 52巻. 445-451 (2002)
[Publications] Kume, A. et al.: "Selective expansion of transduced cells for hematopoietic stem cell gene therapy"Int. J. Hematol.. 76巻. 299-304 (2002)
[Publications] Okada, T. et al.: "AAV mediated gene transfer for gene therapy of ischemia-induced neuronal death"Methods. Enzymol.. 346巻. 378-393 (2002)
[Publications] Wang, L. et al.: "Delayed delivery of AAV-GDNF prevents nigral neurodegeneration and promotes functional recovery in a rat model of Parkinson's disease"Gene Ther.. 9巻. 381-389 (2002)
[Publications] Muramatsu, M. et al.: "Reversible integration of the dominant negative retinoid receptor gene for ex vivo expansion of hematopoietic stem/progenitor cells"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 285巻. 891-896 (2001)
[Publications] Hanazono, Y. et al.: "Gene transfer into nonhuman primate hematopoietic stem cells : implications for gene therapy"Stem Cells. 19巻. 12-23 (2001)

2002 Fiscal Year Annual Research Report

カニクイザルES細胞への遺伝子導入法の開発とその移植応用をめざす研究

Principal Investigator

花園 豊 自治医科大学, 医学部, 講師 (70251246)

Research Products

[Publications] Hanazono, Y.et al.: "Genetic manipulation of primate embryonic and hematopoietic stem cells with simian lentivirus vectors"Trends in Cardiovascular Medicine. (発表予定). (2003)

[Publications] Kume, A.et al.: "In vivo expansion of transduced murine hematopoietic cells with a selective amplifier gene"J. Gene Med.. (発表予定). (2003)

[Publications] Ageyama, N. et al.: "Safe and efficient methods for cynomolgus monkey autologous hematopoietic stem cell transplantation for biomedical researches"Comp. Med.. 52巻. 445-451 (2002)

[Publications] Kume, A. et al.: "Selective expansion of transduced cells for hematopoietic stem cell gene therapy"Int. J. Hematol.. 76巻. 299-304 (2002)

[Publications] Okada, T. et al.: "AAV mediated gene transfer for gene therapy of ischemia-induced neuronal death"Methods. Enzymol.. 346巻. 378-393 (2002)

[Publications] Wang, L. et al.: "Delayed delivery of AAV-GDNF prevents nigral neurodegeneration and promotes functional recovery in a rat model of Parkinson's disease"Gene Ther.. 9巻. 381-389 (2002)

[Publications] Muramatsu, M. et al.: "Reversible integration of the dominant negative retinoid receptor gene for ex vivo expansion of hematopoietic stem/progenitor cells"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 285巻. 891-896 (2001)

[Publications] Hanazono, Y. et al.: "Gene transfer into nonhuman primate hematopoietic stem cells : implications for gene therapy"Stem Cells. 19巻. 12-23 (2001)

花園豊自治医科大学, 医学部, 講師 (70251246)