テロメラーゼ活性化分子、hTERTを標的とした造血器腫瘍の分子標的療法の開発

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13671086
• Research Institution: Tokyo Medical University
• Principal Investigator: 田内 哲三 東京医科大学, 医学部, 講師 (80281377)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 嶋本 隆司 東京医科大学, 医学部, 助手 (60317865)
• Keywords: テロメラーゼ / hTERT / テロメア / アポトーシス

Research Abstract

(1)DN-hTERT、hTERTを含む高力価レトロウイルス産生細胞の作成:DN-hTERT、hTERTを含むレトロウイルスベクターpBABE-puro(Dr. Robert Weinbergより供与済み)をecotropic packaging cell line GP86にリン酸カルシュウム沈降法を用いてトランスフェクトし、48時後にそのsupernatantをamphotropic packaging cell line PA317に添加し105puroR CFU/ml以上の高力価ウイルスを作成した。
(2)DN-hTERT、hTERTの造血器腫瘍細胞株への導入実験
上記により得られた高力価ウイルスを造血器腫瘍細胞株、K562及びRat-1 BCR/ABLへ導入し抗腫瘍効果、アポトーシス誘導効果を解析した。WT-hTERTを遺伝子導入したK562細胞株ではテロメラーゼ活性の上昇、テロメア長の延長が見られたがgrowth curveに変化は認められなかった。これに対し、DN-hTERTを遺伝子導入したK562細胞株ではテロメラーゼ活性の低下、テロメア長の短縮に引き続き、細胞増殖の停止、アポトーシス誘導が認められた。
(3)ヒト白血病モデルマウスにおけるDN-hTERTによる抗腫瘍効果及び抗癌剤感受性の亢進:WT-hTERT及びDN-hTERTをテロメラーゼ陽性ヒト急性リンパ性白血病細胞株、HAL-01に遺伝子導入を行った。DN-hTERTを遺伝子導入したHAL-01細胞株(late passage clone ; PD35)ではテロメラーゼ活性の低下、テロメア長の短縮に引き続き、細胞増殖の停止、アポトーシス誘導が確認された。また、DN-hTERTを遺伝子導入したHAL-01細胞株(early passage clone ; PD10)においてもDaunorubicin感受性の増加が確認された。さらに、Control vectorまたはWT-hTERTを遺伝子導入したHAL-01はヌードマウスに移植後、2ヵ月で腫瘍形成が確認されたが、DN-hTERTを遺伝子導入したHAL-01は4ヵ月の観察期間をおいても腫瘍形成を認めなかった。以上の結果より、DN-hTERT遺伝子導入によるtelomerase維持の破壊によりヒト白血病細胞のアポトーシス誘導が確認され、hTERTを分子標的とする白血病の遺伝子治療の有用性が示唆された。

Research Products

• [Publications] Tauchi T., Yoshimura A., Ohyashiki K.: "CIS1, a cytokine-inducible SH2 protein, suppresses BCR/ABL-mediated transformation. Involvement of the ubiquitin proteasome pathway"Experimental Hematology. 29・3. 356-361 (2001)
• [Publications] Nakajima A., Tauchi T., Ohyashiki K.: "ABL-specific tyrosine kinase inhibitor, STI571 in vitro, affects Ph-positive acute lymphoblastic leukemia and chronic myelogenous leukemia in blastic crisis"Leukemia. 15・6. 989-990 (2001)
• [Publications] Ohyashiki K., Iwama H., Tauchi T., Shimamoto T., Hayashi S., Ando K., Kawakubo K., Ohyashiki J.H.: "Telomere dynamics and genetic instability in disease progression of chronic myelogenous leukemia"Leukemia and Lymphoma. 40・1&2. 49-56 (2001)
• [Publications] Ohyashiki K., Iwama H., Yahata N., Tauchi T., Kawakubo K., Shimamoto T., Ohyashiki J.H.: "Telomere dynamics in myelodysplastic syndromes and acute leukemic transformation"Leukemia and Lymphoma. 40・3. 291-299 (2001)
• [Publications] Ohyashiki J.H., Sashida G., Tauchi T., Ohyashiki K.: "Telomeres and Telomerase in hematologic neoplasia"Oncogene. 21・4. 680-687