2001 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト胸T細胞ネガテイブセレクションにおけるシグナル伝達
Project/Area Number |
13671399
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Research Institution | Nagoya City University |
Principal Investigator |
深井 一郎 名古屋市立大学, 医学部, 助手 (10244550)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤井 義敬 名古屋市立大学, 医学部, 教授 (40156831)
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Keywords | ネガティブセレクション / p53 / シグナル伝達 / TCR |
Research Abstract |
1.ヒト胸腺CD4+CD8+DP cellにおけるTCRシグナル解析 (a)DP cellsをmagnet beads法を用い、sortingして以下の刺激を加えた。 (1)抗CD3抗体(10ug)によりcross linkng (2)抗CD3+28抗体(各10ug)によりdouble cross linkng (3)dexamethazone(50ug)によるp53非依存性アポトーシス刺激 (4)etoposide(50ug)によるp53依存性アポトーシス刺激 (b)DP cellsのアポトーシス解析 上記の刺激したT細胞のアポトーシスの解析をミトコンドリアの膜電位の低下、AnnexinVの発現、caspase3の活性をフローサイトメトリーにて解析し、kineticsを解明した。 (c)p53リン酸化のkiinetic解析 5分間隔でシグナルをとめ、Ser15 Phosph sepecific anti-p53Ab, Ser20 Phospho specific anti-p53Abでwestern blotを行った。同じmembraneを抗体ストリップしてPhospho non specific Abでre-blotしてリン酸化p53の比率を算出した。 以上の結果よりp53リン酸化およびアポトーシスのkiineticを解析した。
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