頭頸部癌におけるIL-12、P53遺伝子治療bystander effectの解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13671792
• Research Institution: Yokohama City University
• Principal Investigator: 佃 守 横浜市立大学, 医学部, 教授 (70142370)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 新井 泰弘 横浜市立大学, 医学部, 講師 (20305478)
• Keywords: 頭頸部癌 / 遺伝子治療 / IL-12gene / 抗腫瘍性 / 抗血管新生阻害作用

Research Abstract

p53遺伝子は特にwild typeのp53遺伝子をもつ細胞を選択したためMOIを上げなければならず実験を中断し、IL-12遺伝子導入での実験のみを行った。
Helpes simplex virus(HSV)をvectorとして、human IL-12(hIL-12)をヒト口腔癌由来のKB細胞に導入し(KB/hIL-12)、その上清中にIL-12産生を認めた。同様にC3Hマウスロ腔癌由来のNR-S1にmouse IL-12(mIL-12)を導入し、mIL-12の産生を認め、遺伝子導入によるIL-12産生を確認した。次にBALB/cのヌードマウスを用いてKB/hIL-12の治療実験を行い、強い抗腫瘍性を認め、この抗腫癌性はKB/hIL-12との併用で増強することを観察した。同様にC3Hマウスを用いてNR-S1/mIL12、また腫傷局所への直接のmIL-12遺伝子注入による抗腫瘍実験を行った。その結果いずれの実験でも、抗腫瘍性を認め、またhIL-2違伝子を併用することでその抗腫瘍性は増強することを観察した。
次にIL-12のbystander effectの抗血管新生作用に注目し、実験を行った。KB細胞はその培養上清中に血管新生因子の一つであるVEGFを多量に分泌していることを確かめ、VEGF産生に及ぼすhIL-12遺伝子導入の影響について検討した。その結果、KB/hIL-12の培養上清中VEGF量はコントロールと比較して有意に低下する傾向が観察された。また血管新生阻害作用をもつCOX-2inhibitorであるJTE-522を用いて、VEGF産生における併用効果を検討したが、KB細胞はCOX-2発現が弱く、このため併用効果は観察されなかった。一方、NR-S1細胞ではmIL-12導入によってその上清中のVEGFは強く抑制され、またCOX-2阻害剤との併用によってさらに,VEGF産生は減少した。この結果からC3HマウスでNR-S1を用いてnIL-12遺伝子導入とCOX-2阻害剤の併用による抗腫瘍性を検討した。その結果、mIL-12とCOX-2阻害剤の併用による強い抗腫瘍性が観察された。現在IL-12遺伝子治療のeffector細胞の解析、IL-12遺伝子治療と化学療法併用によるcomplete respone率で評価する治療法の確立、その抗腫瘍性の機序(apoptosis、血管新生阻害作用など)について検討中である。

Research Products

• [Publications] M Tsukuda: "Reduction of in vivo tumor growth by MMI-166, a selective matrix metallopro-teinase inhibitor, through inhibition of tumor angiogenesis in squamous cell car-cirioma cell lines of head and neck"Cancer letters. 178(2). 151-159 (2002)
• [Publications] M Tsukuda: "The inhibitory effects of TNP470 on tumour growth of head and neck carcinoma cell producing iiiterleukin-8"J Laryngol Otol. 115(10). 802-807 (2001)
• [Publications] M Tsakuda: "Reduced expression of p16 and p27 proteifls in nasopharyngeal carcinoma"Cancer Deteciori and Prevention. 25(5). 414-419 (2001)
• [Publications] M Tsukuda: "Induction of sparc by VEGF in human vascular endotherial cells"Biochem Biopyhs Rca Commun. 287(2). 422-426 (2001)
• [Publications] M Tsukuda: "Cytostatic ellect ol inostarnycin, an inhibitor of cytidine5'-diphosphate1,2,-diacyl-sn-giycerol(CDP-DG):inosjtoi transferase, on oral szuamous cell carcinoma cell lines"Cell Bial Int. 25(7). 613-620 (2001)
• [Publications] 佃 守: "頭頸部癌新しい治療の展開"癌と化学療法. 28(4). 464-474 (2001)
• [Publications] 佃 守: "21世紀耳鼻咽喉科 領域の臨床18免疫アレルギー疾患 Biological response modifier(BRM)とサイトカインによる治療"中山書店. 11 (2001)