ニトロソ化による内因性プロテアーゼインヒビターの活性増強

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13671931
• Research Institution: Fukuoka Dental College
• Principal Investigator: 上西 秀則 福岡歯科大学, 歯学部, 教授 (90084300)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 赤池 孝章 熊本大学, 医学部, 助教授 (20231798) ; 竹内 尚子 福岡歯科大学, 歯学部, 助手 (50198800) ; 小倉 理恵子 福岡歯科大学, 歯学部, 助手 (80320331) ; 濱本 高義 化学及血清療法研究所, 血液製剤部門, 研究員
• Keywords: Porphylomonas gingivalis / プロテアーゼ / α-2アンチプラスミン / ニトロソ化 / プロテアーゼインヒビター / vesicle

Research Abstract

H13年度はα2アンチプラスミン(API)のニトロソ化について実験を行った。この結果、APIを効率よく還元するには、反応液に加えるEDTAの濃度が5mM、ジチオスレイトール(DTT)の濃度が50mMが最適であることがわかった。また、還元APIのニトロソ化はイソフェニールナイトライトの濃度は4mMで、処理時間は1時間が最適であることがわかった。
H14年度:
1)得られたニトロソ化APIはPorphylomonas gingivalis由来プロテアーゼの活性を濃度依存的に阻害した。しかし、対象として用いた通常のAPIは阻害活性をまったく示さないことがわかった。このことはPorphylomonas gingivalis由来プロテアーゼの活性中心にあるステインのSH基がニトロソ化APIに由来するNOが転移し、そのために酵素活性が阻害されたものと推察された。
2)Porphylomonas gingivalisは菌体外にvesicleを放出することが知られている。このvesicleは菌体の外膜成分からなるもので、LPSや菌から分泌されるプロテアーゼを含んでいることから、菌の重要な病原因子の一つとして位置付けられている。
(1)このvesicleはプロテアーゼ活性を示すが、作成したニトロソ化APIで処理すると、プロテアーゼ活性は90%以上が阻害された。
(2)RAW264細胞をvesicleで処理するとNOの産生誘導が観察される。しかし、ニトロソ化APIで処理されたvesicleによる処理ではNO産生誘導が60%程度にまで抑制された。このことから、ニトロソ化APIはPorphylomonas gingivalisの病原作用を減弱させることが推察され、また、菌そのものの増殖をも阻害する可能性が推察される。
これらの成果をもとに、平成15年度の研究を遂行する予定である。

Research Products

• [Publications] Inoue, Y., Fukushima, T., et al.: "Antibacterial Characteristics of Newly Developed Amphiphilic Lipids and DNA-lipid Complexes against Bacteria"Journal of Biomedical Material Research. (in press). (2003)
• [Publications] Cho, T., M.Sudoh, H, Kaminishi et al.: "Isolation and sequencing of the Candida albicans MS13, a putative novel member of the HSP70 family"Yeast. 20. 149-156 (2003)
• [Publications] 上西秀則 ほか: "真菌の遺伝学"日本臨牀. 61・3. 785-792 (2003)