2001 Fiscal Year Annual Research Report

免疫細胞への標的機能をもつファージライブラリ人型抗体の作製と免疫制御

Research Project

Project/Area Number	13672325
Research Institution	Kagoshima University
Principal Investigator	伊東祐二鹿児島大学, 工学部, 助教授 (60223195)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	中島敏博 (財)化学及血清療法研究所, 上級研究員杉村和久鹿児島大学, 工学部, 教授 (80127240)
Keywords	抗体医薬 / 単鎖Fv抗体 / 補助刺激分子 / 阻害抗体 / 免疫反応の制御 / ファージディスプレイ / DNAワクチン / ワクチン開発
Research Abstract	本研究の目的は,免疫細胞上の補助刺激にかかわるリガンド/レセプター分子に対する特異的なヒト型抗体(単鎖Fv)をファージディスプレイシステムによって作製し,その抗体を用いた免疫細胞の標的化と補助刺激シグナルの阻害による免疫反応の活性化の制御法を確立,そのシステムを応用した効果的なDNAワクチンのベクターの設計,開発を行うことである。我々は,人末梢血のB細胞のcDNAを基に,抗体のFv領域の遺伝子ライブラリ(VHとVL)を作製し,そのライブラリをPCRによって増幅するとともに,単鎖Fv(scFv)化した形で,ファージ表面に提示したファージディスプレイヒトscFv抗体ライブラリを構築している。本年度は、このライブラリを用いて,ヒトT細胞上のいくつかの補助刺激分子と抗原禎治細胞(APC)上のリガンドを標的とした抗体ファージをパニングによって単離した。得られたファージクローンから,抗体遺伝子を可溶性抗体として、大腸菌に発現させ、その結合活性、リガンド・レセプター間の相互作用に対する阻害活性について評価した。 APC上の補助刺激分子リガンドであるCD86に特異的に結合するscFvファージクローンがDNAシークエンス解析の結果4種類得られた。これらのクローンを基に可溶性scFvを大腸菌に発現させたところ、いずれのクローンとも可溶清蛋白質として細胞外ならびにペリプラズム画分に発現されたが、その結合活性は、クローンならびに発現画分によって異なっていた。これらのscFvは、いずれも、CD86とそのレセプターであるCTLA-4との結合を阻害したが、その結合力は、Kd値で、数十nMであった。その他の補助刺激分子に対する抗体を取得して、特許申請を行い、本研究を遂行する予定である。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] 加治正知 (他, 7名): "Peptide mimics of monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)with an antagonistic activity"Journal of Biochemistry. 129. 577-583 (2001)
[Publications] 杉村和久 (他, 7名): "IL-6-binding motif peptides inhibiting the signaling of human IL-6 to human 1L-6 receptor but not murine IL-6 receptor"Scandinavian Journal of Immunology. 54. S105 (2001)
[Publications] 橋口周平 (他, 4名): "Human FcεRIα-specific human single chain Fv(scFv)antibody"Scandinavian Journal of Immunology. 54. S103 (2001)
[Publications] 窪田敏夫 (他, 4名): "DnaA protein Lys-415 is close to the ATP-binding site : ATP-pyridoxal affinity labeling"Biochemical and Biophysical Research Communication. 288. 1141-1148 (2001)
[Publications] 杉村和久 (他, 8名): "Peptide mimics of monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)with an antagonistic activity"Scandinavian Journal of Immunology. 54. S105 (2001)
[Publications] 伊東祐二 (他, 6名): "Structure-activity Relationship of Cytokine-mimic Peptide from Phage Library"Peptide Science 2001. 2001. 113-116 (2002)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

免疫細胞への標的機能をもつファージライブラリ人型抗体の作製と免疫制御

Principal Investigator

伊東 祐二 鹿児島大学, 工学部, 助教授 (60223195)

Research Products

[Publications] 加治正知 (他, 7名): "Peptide mimics of monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)with an antagonistic activity"Journal of Biochemistry. 129. 577-583 (2001)

[Publications] 杉村和久 (他, 7名): "IL-6-binding motif peptides inhibiting the signaling of human IL-6 to human 1L-6 receptor but not murine IL-6 receptor"Scandinavian Journal of Immunology. 54. S105 (2001)

[Publications] 橋口周平 (他, 4名): "Human FcεRIα-specific human single chain Fv(scFv)antibody"Scandinavian Journal of Immunology. 54. S103 (2001)

[Publications] 窪田敏夫 (他, 4名): "DnaA protein Lys-415 is close to the ATP-binding site : ATP-pyridoxal affinity labeling"Biochemical and Biophysical Research Communication. 288. 1141-1148 (2001)

[Publications] 杉村和久 (他, 8名): "Peptide mimics of monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)with an antagonistic activity"Scandinavian Journal of Immunology. 54. S105 (2001)

[Publications] 伊東祐二 (他, 6名): "Structure-activity Relationship of Cytokine-mimic Peptide from Phage Library"Peptide Science 2001. 2001. 113-116 (2002)

伊東祐二鹿児島大学, 工学部, 助教授 (60223195)