免疫抑制剤FTY720の酵素免疫測定法開発とその認識機能解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13672331
• Research Institution: RESEARCH INSTITUTE FOR PRODUCTION DEVELOPMENT
• Principal Investigator: 藤多 哲朗 財団法人生産開発科学研究所, 創薬設計研究室, 研究員 (40027024)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 河野 武幸 摂南大学, 薬学部, 助教授 (50178224)
• Keywords: 免疫抑制剤 / FTY720 / 酵素免疫測定法 / ハプテン / 臓器移植 / 薬物動態 / エピトープ解析 / 薬物認識部位

Research Abstract

臓器移植の成功率を画期的に上昇させた薬剤は、シクロスポリンに始まりタクロリムスも大きく貢献している。しかし、これらの両薬剤は作用機構が同様であり、腎障害等の副作用がある。我々の新規免疫抑制剤FTY720は、その作用機構がこれら二者と大きく異なっていることから、臨床においてその開発が期待されている。本剤を臨床に供給するには薬物動態、組織分布などの解析が必要であり、これを可能とするには、FTY720の抗体が必須である。そこで抗原特異的かつ微量検出・定量の可能な酵素免疫測定法を確立するために本研究を開始した。FIY720は基本骨格(2-aminopropane-1,3-diol)の2-位に(4-octyl)phenylethyl基を有する構造をもっている。
本研究の初年度において、FTY720そのものに近い(4-mercaptooctyl)phenylethyl基構造をもつハプテン(AMPD-8)を4-フェニル酪酸から14工程で合成し抗体を作成した。この抗体の抗原認識部位(エピトープ)の解析結果は、FTY720の活性発現の必須構造を明らかに認識するものであり、微量検出・定量の可能な酵素免疫測定法を確立することができた。
本年度は更に特異性・精度を求めて、モノクロナール抗体調製に努力し、以下の実績を得た。Balb/c雌性マウスを(AMPD-8)-卵白アルブミン複合体で感作し、ELISA法によって抗体価の上昇を確認した。感作マウスの脾細胞をミエローマ細胞(Sp2/0-Ag14)と融合、融合細胞を得、続いて抗体産生ハイブリドーマのクローニングを2度行った。これらの過程で選択されたクローンをBalb/cヌードマウスの腹腔内に注射し、腹水を得た。次に、プロテインAセファロースを用いて腹水から抗体の精製を行い、サブクラスIgG1のモノクローナル抗体を3種類を得ることができた。

Research Products

• [Publications] 河野武幸, 辻 琢己, 平山かおり, 渡部一仁, 藤多哲朗, 林 正俊: "実験的重症筋無力症モデルマウスのTh1/Th2サイトカインmRNA産生量と新規免疫抑制剤(FTY720)の影響"日本神経免疫学会機関誌. 11・1. 103 (2003)