F因子DNA―タンパク質高次複合体構造のモジュレーションと分配機能

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13680751
• Research Institution: RIKKYO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 花井 亮 立教大学, 理学部, 助教授 (30287916)
• Keywords: Fプラズミド / 染色体分配 / 大腸菌 / リプレッサー / 結晶構造解析

Research Abstract

本研究の目的は、大腸菌のF因子DNA分配遺伝子産物、SopAとSopBとF因子DNAとの高次複合体の構造、および、そのモジュレーションによる分配の遂行過程を解明することにある。本年度の成果は次の通りである。
(1)等電点電気泳動により、SopBには2つの分子種の存在することが明らかになった。消化酵素による分解産物をHPLCで分離してTOF-MSをおこなった結果、遺伝子によってコードされているアミノ酸配列からは予測されないペプチドが2種検出された。修飾部位は、N末とC末に存在することが分かったが、分子量の差は、既知の修飾によってもアミノ酸置換によっても説明できない。
(2)SopBと細胞内で結合するタンパク質を、アミノ酸特異的な可逆な架橋反応と、抗SopB抗体カラムを用いて単離できることが明らかになった。結合の化学量論数はほぼ1:1である。
(3)SopAを精製して結晶化を試みた。その結果、1.4-1.7M硫安、0.1Mクエン酸pH5.8、20℃で板状結晶が集積したものが得られた。
(4)SopAのDNA結合部位は自分の遺伝子のプロモータ領域に4つあることが報告されているが、結合様式は不明である。それぞれの塩基配列を改変したところ次のことが明らかになった。(1)ミニF因子DNAのコピー数に変化はない。(2)最上流の結合部位に変異を入れたものでは、SopAの生産量が約2倍、その他のものでは約2.8倍に増大した。(3)SopBの生産量は約1-1.3倍であった。

Research Products

• [Publications] Hanai, R., Mashima, K.: "Characterization of two isoforms of a human DnaJ homologue, HSJ2"Mol. Biol. Rep.. (印刷中).