2002 Fiscal Year Annual Research Report
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13680863
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
山口 正洋 東京大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (60313102)
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| Keywords | 神経新生 / 鋤鼻神経 / ネスチン / GFP |
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| Research Abstract |
嗅覚系神経上皮における神経細胞の増殖分化の様相を検討するため、成体マウスの片側の嗅球を外科的に除去して片側の神経上皮の神経増殖を促し、増殖細胞を核酸アナログであるBrdU投与によって標識し、時間を追って観察した。嗅覚系神経上皮には匂い分子を感知する嗅上皮と、フェロモン分子を感知する鋤鼻神経上皮があり、前年度の研究から嗅球除去によるBrdU陽性細胞の増加は鋤鼻神経上皮においてより著しいことが分かったため、本年度は鋤鼻神経上皮を対象にして解析を行った。無処置側ではBrdU陽性細胞は基底層にごく少数散在するのみであったが、処置側ではBrdU陽性細胞が基底層全体にわたって多数観察され、定常状態では増殖可能な細胞の多くは休止状態にあり、これが刺激を受けると活発な増殖を始めると推察された。このBrdU陽性細胞は、数日後には神経上皮のより表層に近い層に移動し、GAP-43,beta-III tubulinなどの神経分化マーカーを発現していた。鋤鼻神経上皮は深層と浅層の2層から成り、それぞれGo陽性、Gi陽性神経細胞が分布していることが知られている。BrdU標識実験から、細胞分裂後初期には新生神経細胞はGo陽性であり、その後Go陽性、Gi陽性細胞の2種に分化することが分かり、鋤鼻神経上皮の2種類の神経細胞は共通のGo陽性未分化神経細胞から分化することが示唆された。この分化過程をより詳細に解析するため、未分化神経細胞を可視化できるネスチン-GFPマウスに嗅球除去を行い、増加したGFP陽性細胞の単離回収を目指した。神経上皮を剥離し、トリプシン処理によって細胞を分離し、蛍光顕微鏡下でGFP陽性神経細胞を選択的に回収する方法を確立することができた。現在このGFP陽性細胞をin vitroで分化誘導する実験系を検討中であり、この培養系を用いて、より詳細な神経分化の分子機構を調べる予定である。
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