2002 Fiscal Year Annual Research Report
ファージディスプレイ法を用いたネコ免疫不全ウイルスのレセプター群の解析
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13760220
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
宮沢 孝幸 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (80282705)
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| Keywords | FIV / レセプター / CXCR4 / ファージディスプレイ / cDNAライブラリー / ネコ / 免疫不全 / 動物モデル |
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| Research Abstract |
ネコ免疫不全ウイルス(FIV)は、ネコに免疫不全を誘導し、獣医臨床上の大きな問題となっている。FIVとネコの系はヒトのエイズの動物モデルとしても重要である。本研究は、抗体ファージディスプレイ法を応用した新しいアプローチで、FIVのレセプター(群)を同定・解析することを目的とする。本年度の研究成果は以下の通りである。
FIVのレセプターを発現するMYA-1細胞からmRNAを抽出後、cDNAを合成し、それをレトロウイルスベクター(pMX)に導入した。このpMXに導入したcDNAライブラリーを、Ecotropic-MuLVのパッケージング細胞であるPlat-E細胞にFuGene6でトランスフェクトすることにより、MYA-1細胞由来のcDNAを発現するレトロウイルスライブラリーを作出した。新しく開発したPanning法とレトロウイルス発現クローニング法により、Petaluma株のEnvelopeに結合する分子のクローニングを行った。その結果、Petaluma株のEnvelopeに強く結合する分子(FIV Envelope Ligand ; FIEL)のクローニングに成功した。FIELの遺伝子配列を決定したところ、ヒトやマウスのCD134とホモロジーが高く、ネコのCD134ホモログであると考えられた。このFIEL分子発現プラスミドをCRFK細胞に導入したところ、通常CRFK細胞に感染しないTリンパ球指向性の株であるTM2株の感染に感受性となった。この結果は、FIEL分子がTリンパ球指向性の株がTリンパ球に感染する際の、主要な受容体となっていることを強く示唆する。FIEL分子はTリンパ球活性化抗原であることから、FIVがこの分子を受容体とすることで、ネコをエイズに誘導する可能性が示唆された。
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[Publications] Miyazawa, T.: "Infections of feline leukemia virus and feline immunodeficiency virus"Frontiers in Bioscience. 7. D504-D518 (2002)
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[Publications] 宮沢孝幸: "ネコ白血病ウイルス研究の最新の知見"Small Animal Clinic. 129. 20-27 (2002)
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[Publications] Shimojima, M., Miyazawa, T., et al.: "A feline homologue interacts with human red blood cells"Immunology. 105. 360-366 (2002)
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[Publications] Kohmoto, M., Miyazawa, T., et al.: "Experimental mucosal infection with molecularly cloned feline immunodeficiency viruses"Clin.Diag.Lab.Immunol.. 10. 185-188 (2003)
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[Publications] Nakamura, K., Miyazawa, T.et al.: "Phylogenetic analysis of Vietnamese isolates of feline immunodeficiency virus: genetic diversity of subtype C"Arch.Vriol.. (in press). (2003)
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[Publications] Shimojima, M., Miyazawa, T.et al.: "Usage of myeloma and panning in retrovirus-mediated expression cloning"Anal.Biochem.. (in press). (2003)
