2001 Fiscal Year Annual Research Report
カルネキシン/カルレティキュリンのシャペロン分子機構と細胞分化における意義の解明
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13770070
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Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
井原 義人 長崎大学, 医学部, 講師 (70263241)
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| Keywords | カルネキシン / カルレティキュリン / シャペロン / レクチン / 糖タンパク質 |
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| Research Abstract |
カルネキシン(CNX)とカルレティキュリン(CRT)はERに存在するCa^<2+>結合性の分子シャペロンである。CNX/CRTによるシャペロン作用や他のERシャペロンとの相互作用などについての詳しい分子機構はいまだ明らかではない。平成13年度は、CNXについて、他のERシャペロンであるGrp78/Bipとの協調機構を解析し、ERにおける糖タンパク質生合成の分子機構を明らかにした。
具体的にはCNXのin vitroフォールディングアッセイ系を用いて、CNXとGrp78/Bipの協調機構の解析を行った。CNXは大腸菌で大量発現したものを精製、調整した。CNXの認識する基質は、Jack bean α-mannosidaseを用い、α-Mannosidaseを6M塩酸グアニジンで変性した後、希釈してタンパク質の凝集を誘導した。この系にCNXを添加して、その基質の凝集抑制能を測定することにより、シャペロン作用を評価した。また、同実験系に酵母由来の精製したGrp78/BipとHsp40のJドメインタンパク質を加えることにより、CNXとGrp78/Bipの協調作用を、HPLCによるゲルろ過、Dynamic Light Scattering、分子内蛍光の測定、電子顕微鏡(Negative staining)などにより解析した。
解析の結果、以下のことが明かとなった。
1)非糖タンパク質基質に対して、CNXとGrp78/Bipは同様のin vitroシャペロン活性を示した。
2)一方、糖タンパク質基質に対して、CNXはGrp78/Bipに比べ、著しいタンパク凝集阻止活性をin vitroアッセイ系で示した。
3)ATP依存性のin vitroタンパク質リフォールディングアッセイ系において、CNXとGrp78/Bipは協調的にタンパク質のリフォールディングを促進させることがわかった。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] N.Taniguchi, et al.: "A glycomic approach to the identification and characterization of glycoprotein function in cells transfected with glycosyltransferase genes"Protemics. 1. 239-247 (2001)
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[Publications] K.Doi, et al.: "Alteration of antioxidants during the progression of heart disease in streptozotocin-induced diabetic rats"Free Rad.Res.. 34. 251-261 (2001)
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[Publications] S.Victoria, et al.: "Relationship between calnexin and BiP in suppressing aggregation and promoting refolding of protein and glycoprotein substrates"J, Biol.Chem.. 276. 39779-39787 (2001)
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[Publications] T.Iida, et al.: "Hammerhead ribozyme against g-glytamylcysteine synthetase sensitizes human colonic cancer cells to cisplatin by downregulating both the glutathione synthesis and the expression of multidrug resistance proteins"Cancer Gene Therapy. 8. 803-814 (2001)
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[Publications] S.Goto, et al.: "Doxorubicin-induced DNA intercalation and scavenging by nuclear glutathione S-transferase π"FASEB J. 15. 2702-2714 (2001)
