DNAメチル化の抑制と各種成長因子による細胞形質転換の抑制、抗癌剤耐性機構の克服

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13770672
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 前田 真悟 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (80317156)
• Keywords: DNA methylation / 抗癌剤感受性 / antisense oligonulcleotide / 胃癌細胞株 / 5-FU / CDDP

Research Abstract

近年、DNA methylationと遺伝子の発現制御との関連が注目され、HDRなどの抗癌剤感受性因子との関連も報告されてきた。われわれは、DNA methyltransferaseに対するantisense oligonucleotideを作成し、DNA methylationが及ぼす5-FU及びCDDPへの感受性変化を検討した。
胃癌細胞株TMH-1、MKN-45、MKN-74に対し、DNA methyltransferaseのantisense oligonucleotideまたはnonsense oligonucleotideを2.5uMの濃度で前処置した後、抗癌剤5-FU(1.100ug/ml)またはCDDP(0.5.50ug/ml)を接触させ、抗癌剤感受性をMTT assayまたはBrdU uptake incorporation assay(BrdU assay)で判定した。
DNA methyltransferaseに対するantisense oligonucleotideの配列は、5-TCTATTTGAGTCTGCCATTT-3とした。nonsene oligonucleotideの配列は、5-TGTGATTCTCCTTATTCGA-3とし、antisense oligonucleotideの塩基配分と同様に作成した。
結果として、antisense群はnonsense群と比較して、5-FUに関しては、TMK-1、MKN-45で約20%の感受性の増強がみられ、感受性因子として、TS mRNA、DPD mRNAの発現を定量的PCR法を用いて測定したが、TS mRNAは両群で差がなく、DPD mRNAはantisense群で有意に低下していた。CDDPでもTMK-1、MKN-45で約15%の感受性の増強が認められた。