2001 Fiscal Year Annual Research Report
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13780594
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Research Institution | Himeji Institute of Technology |
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Principal Investigator |
日下部 岳広 姫路工業大学, 理学部, 助教授 (40280862)
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| Keywords | ホヤ / 眼点 / 視細胞 / オプシン遺伝子 / 神経系 / 細胞分化 / 転写調節 / Pax-6遺伝子 |
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| Research Abstract |
1.視細胞特異的タンパク質のcDNAクローニングと発現解析:オプシンおよびcGMPホスホジエステラーゼをコードするcDNAをカタユウレイボヤ尾芽胚または幼生からクローニングした。脊椎動物の視物質によく似たタンパク質をコードするCi-opsin1、脊椎動物の網膜色素上皮で発現するRGRに類似のタンパク質をコードするCi-opsin3、cGMPホスホジェステラーゼδサブユニットをコードするCi-PDEδが得られた。各遺伝子の発現パターンを調べ、Ci-opsin1は視細胞で、Ci-opsin3は脳胞と運動神経節で、Ci-PDEδは脳胞内の平衡器に隣接する細胞で、それぞれ特異的に発現することが明らかになった。
2.視細胞特異的遺伝子の転写調節領域の機能解析:カタユウレイボヤ幼生の視細胞で特異的に発現するアレスチンのcDNAが共同研究者により最近クローニングされた。Ci-opsin1とアレスチン、それぞれの遺伝子上流領域をゲノムDNAからPCRより増幅し、クローニングして塩基配列を決定した。各々をGFP遺伝子に連結して、ホヤ胚に導入し、GFP遺伝子の発現を調べた。アレスチンについては視細胞特異的な発現に十分な領域(2.9kb)が得られた。オプシンについては、得られた2.0kbの上流領域では視細胞でのレポーター遺伝子の発現がみられなかったので、現在さらに上流の領域を含むゲノムDNA断片のクローニングを行っている。
3.視細胞特異的な転写調節に関わる転写因子のcDNAクローニング:多くの動物で眼の発生に関与することが知られている転写因子Pax-6のcDNAをクローニングし、完全長の塩基配列を決定した。発現パターンを調べたところ、後期嚢胚期より予定神経索細胞で発現が始まり、発生が進むに従って脳胞でも発現することが明らかになった。
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[Publications] Takehiro Kusakabe: "Ci-opsin1, a vertebrate-type opsin gene, expressed in the larval ocellus of the ascidian Ciona intestinalis"FEBS Letters. 506・1. 69-72 (2001)
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[Publications] Takehiro Kusakabe: "A cis-regulatory element essential for photoreceptor-specific expression of a medaka retinal guanylyl cyclase gene"Development Genes and Evolution. 211・3. 145-149 (2001)
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[Publications] Takehiro Kusakabe: "Evolution of anural development in ascidians : role of muscle-specific differentiation genes"The Biology of Ascidians. 1. 235-239 (2001)
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[Publications] Takehiro Kusakabe: "Gene expression profiles in tadpole larval of Ciona intestinalis"Developmental Biology. 242・2. 188-203 (2002)
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[Publications] Yutaka Satou: "Ciona intestinalis cDNA projects : EST analyses and gene expression profiles during embryogenesis"Gene. (印刷中). (2002)
