ネコ免疫不全FIVの抗酸化剤治療の基礎的検討と臨床応用

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13876069
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 桑原 幹典 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (10002081)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 佐藤 れえ子 岩手大学, 農学部, 助教授 (80142892) ; 稲波 修 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (10193559)
• Keywords: FIV / 抗酸化剤 / 転写因子 / アポトーシス / NFκB / 細胞死 / ゲルシフトアッセイ / 白血球

Research Abstract

本研究はヒトエイズのネコのホモログであるFIVにおいて、FIVのウイルス増殖の際生じる活性酸素の上昇に呼応して活性化するNFκBなどの転写因子にレドックス制御が関与するかどうか、抗酸化物質で抑制されるのか、さらには、それが、実際の疾患に対して、抗酸化物質が治療効果を増強できるのかを明らかにする目的で実験を行った。初年度は酸化ストレスによって転写因子NFκBやAP-1などの活性化のアッセイ系を確立し、抗酸化剤の効果をインビトロで確立することを目的とした。モデル系として牛血管内皮細胞とMOLT-4細胞を用いて、過酸化水素処理あるいは放射線照射による転写因子NFκ-BとAP1の活性活性化のゲルシフトアッセイ法をもちいて検討した。NFκ-BならびにAP-1のDNA上流のコンセンサス領域の配列の20mer程度のDNAを用意し、T4キナーゼで^<32>P末端ラベルし、細胞の核抽出物と一緒にインキュベーションし、中性条件下で電気泳動を行い、NFκ-BがDNAと結合するとゲル上で移動度が遅くなる(シフト)ことでその活性を評価する方法である。その結果、過酸化水素1mM処理あるいは放射線照射でスーパーシフトしたバンドがそれぞれ観察され、抗NFκB抗体あるいは抗c-Jun抗体処理で消失した。また、別の転写因子活性の測定法として分泌型アルカリフォスファターゼの遺伝子の上流にNFκB,AP-1,NF-AT,CRE,MYC,GREあるいはSREなどの転写因子のコンセンサス配列を組み込んだレポーターアッセイシステムを導入し、測定系を確立した。また、これら転写因子活性化に対する抗酸化剤の効果ではαフェニルブチルニトロン(PBN)が酸化ストレス誘導AP-1の活性化を抑制することが明かとなった。次年度はネコ白血球を用いて、研究を発展させて行く予定である。

Research Products

• [Publications] M.Yamagutchi ら: "Serum-free coculture system for ex vivo expansion of human cord blood primitive progenitors and SCID mouse-reconstituting cells using human bone marrow primary stromal cells"Experimental Hematology. 29. 174-182 (2001)
• [Publications] T.Yamamori ら: "Roles of p38 MAPK, PKC and PI3-K in the signaling pathways of NADPH oxidase activation and phagocytosis in bovine polymorphonuclear leukocytes"FEBS Letter. 467. 253-258 (2001)
• [Publications] M.Tsuji ら: "Induction of neurite outgrowth in PC12 cells by α-phenyl-N-tert-butylnitron through activation of protein kinase C and the Ras-extracellular signal-regulated kinase pathway"Journal of Biological Chemistry. 276. 9400-9605 (2001)
• [Publications] K.Iwasaki ら: "Kuwabara and M.Niiyama, Isolation, characterization, and cDNA cloning of chicken turpentine-induced protein, a new member of the scavenger receptor cysteine-rich(SRCR)family of protein"Journal of Biological Chemistry. 276. 9400-9405 (2001)
• [Publications] H.Abe ら: "Superoxide generation from human polymorphonuclear leukocytes by liposome-encapsulated hemoglobin"Artif Cells Blood Substit Immobil Biotechnol. 29. 275-283 (2001)
• [Publications] K.Niwa ら: "p38 MAPK and Ca^<2+> contribute to hydrogen peroxide-induced increase of permeability in vascular endotherial cells but ERK does not"Free Radical Research. 35. 519-527 (2001)
• [Publications] T.Asanuma ら: "Thrree dimentional magnetic resonance imaging of lung and liver tumors in mice by use of transversal multislice magnetic resonance image"Comparative Medicine. 51. 138-144 (2001)
• [Publications] I.Kashiwakura ら: "Effects of amifostine on the proliferation and differentiation of megakaryocytic progenitor cells"Europearn Journal of Pharmacology. 437. 19-25 (2002)
• [Publications] K.Takahashi ら: "Protein synthesis-dependent apoptotic signalling pathway in X-irradiated MOLT-4 human leukaemia cell.line"International Journal of Radiation Biology. 78. 115-124 (2002)
• [Publications] O.Inanami ら: "Hypoxia and etanidazol alter radiation-induced apoptosis in HL60 cells but not MOLT-4 cells"International Journal of Radiation Biology. (印刷中).
• [Publications] 桑原幹典: "医学のあゆみ"一重項酸素により誘導されるアポトーシスシグナル伝達. 86-88 (2001)