ネコ免疫不全FIVの抗酸化剤治療の基礎的検討と臨床応用

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13876069
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 桑原 幹典 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (10002081)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 佐藤 れえ子 岩手大学, 農学部, 助教授 (80142892) ; 稲波 修 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助教授 (10193559)
• Keywords: FIV / 抗酸化剤 / 転写因子 / アポトーシス / NFκB / 細胞死 / ゲルシフトアッセイ / 白血球

Research Abstract

本研究はヒトエイズのネコのホモログであるFIVにおいて、FIVのウイルス増殖の際生じる活性酸素の上昇に呼応して活性化するNFκBなどの転写因子にレドックス制御が関与するかどうか、抗酸化物質で抑制されるのか、さらには、それが、実際の疾患に対して、抗酸化物質が治療効果を増強できるのかを明らかにする目的で基礎的な検討を行った。まず、酸化ストレスによって転写因子NFκBやAP-1などの活性化のアッセイ系を確立し、抗酸化剤の効果をインビトロで評価できる確立した。モデル系として牛血管内皮細胞とMOLT-4細胞を用いて、過酸化水素処理あるいは放射線照射による転写因子NFκ-BとAP1の活性活性化のゲルシフトアッセイ法をもちいて検討した。。その結果、過酸化水素1mM処理あるいは放射線照射でスーパーシフトしたバンドがそれぞれ観察され、抗NFκB抗体あるいは抗c-Jun抗体処理で消失した。また、これら転写因子活性化に対する抗酸化剤の効果ではαフェニルブチルニトロン(PBN)が酸化ストレス誘導AP-1の活性化を抑制することが明かとなった。更に、RAWマクロファージ細胞でのLPS誘発NFκ-Bの活性化において、同じ抗酸化物質であるカテキンでは影響を受けず、LPS誘発AP-1がSAPK/JNKの活性化のレベルで抑制されることにより、活性化抑制を起こしていることを示しており、抗酸化物質の種類によってレドックス制御を受ける転写因子が異なることが示された。以上の結果から、FIVの宿主細胞内で必要な転写因子であるNFκ-BやAP-1の活性を細胞外から与えた抗酸化物質によって、抑制的に修飾できることを示しており、抗酸化剤によるウィルス増殖制御の可能性が示された。

Research Products

• [Publications] Niwa, K., Inanami, O., Yamamori, T., Ohta, T., Hamasu, T., Karino, T., Kuwabara, M.: "Roles of protein kinase C delta in the accumulation of P53 and the induction of apoptosis in H_2O_2-treated bovine endothelial cells"Free Radical Research. 36. 1147-1153 (2002)
• [Publications] Nakajima, T., Iwabuchi, S., Miyazaki, H., Okuma, Y., Inanami, O., Kuwabara, M., Nomura, Y., Kawahara, K.: "Relationship between the activation of cyclic AMP responsive element binding protein and ischemic tolerance in the penumbra region of rat cerebral cortex"Neuroscience Letters. 331. 13-16 (2002)
• [Publications] Asanuma, T., Ishibashi, H., Konno, A., Kon, Y., Inanami, O., Kuwabara, M.: "Assessment of neuroprotective ability of a spin trap, alpha-phenyl-N-tert-butylnitrone, against malonate-induced ischemic injury of rat brain by apparent water diffusion coefficient mapping"Neuroscience Letters. 329. 281-284 (2002)
• [Publications] Kashiwakura, I., Inanami, O., Murakami, M., Takahashi, T.A., Kuwabara, M., Takagi, Y.: "Effects of the combination of thrombopoietin with cytokines on the survival of X-irradiated CD34(+) megakaryocytic progenitor cells from normal human peripheral blood"Radiation Research. 158. 202-209 (2002)
• [Publications] Kuwabara, M., Iida, Y., Inanami, O., Sawamura, S., Yokoyama, K., Tsujitani, M.: "Radiation-chemical properties of the hypoxic cell radiosensitizer doranidazole (PR-350)"Journal of Radiation Research (Tokyo). 43. 77-88 (2002)
• [Publications] Yamamori, T., Inanami, O., Sumimoto, H., Akasaki, T., Nagahata, H., Kuwabara, M.: "Relationship between p38 mitogen-activated protein kinase and small GTPase Rac for the activation of NADPH oxidase in bovine neutrophils"Biochemical and Biophysical Research Communications. 293. 1571-1578 (2002)
• [Publications] Inanami, O., Sugihara, K., Okui, T., Hayashi, M., Tsujitani, M., Kuwabara, M.: "Hypoxia and etanidazole alter radiation-induced apoptosis in HL60 cells but not in MOLT-4 cells"International Journal of Radiation Biology. 78. 267-274 (2002)
• [Publications] Kashiwakura, I., Murakami, M., Inanami, O., Hayase, Y., Takahashi, T.A., Kuwabara.M., Takagi, Y.: "Effects of amifostine on the proliferation and differentiation of megakaryocytic progenitor cells"Europearn Journal of Pharmacology. 437. 19-25 (2002)
• [Publications] Takahashi, K., Inanami, O., Hayashi, M., Kuwabara, M.: "Protein synthesis-dependent apoptotic signalling pathway in X-irradiated MOLT-4 human leukaemia cell line"International Journal of Radiation Biology. 78. 115-124 (2002)
• [Publications] Yamaguchi, M., Hirayama, F., Wakamoto, S., Fujihara, M., Murahashi, H., Sato, N., Ikebuchi, K., Sawada, K., Koike, T., Kuwabara, M., Azuma, H., Ikeda, H.: "Bone marrow stromal cells prepared using AB serum and bFGF for hematopoietic stem cells expansion"Transfusion. 42. 921-927 (2002)
• [Publications] Yamaguchi, M., Hirayama, F., Murahashi, H., Azuma, H., Sato, N., Miyazaki, H., Fukazawa, K., Sawada, K., Koike, T., Kuwabara, M., Ikeda.H., Ikebuchi, K.: "Ex vivo expansion of human UC blood primitive hematopoietic progenitors and transplantable stem cells using human primary BM stromal cells and human AB serum"Cytotherapy. 4. 109-118 (2002)