核酸医薬(NF-κB decoy)を用いた遺伝子放射線治療

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13877139
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 田中 英一 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (10324774)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 森下 竜一 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (40291439) ; 大関 修治 大阪大学, 遺伝情報実験センター, 助手 (80093384) ; 井上 武宏 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (10159981)
• Keywords: 放射線治療 / 遺伝子治療 / 癌 / デコイ / NF-kappaB / 転写因子

Research Abstract

1)HVJ-Liposome法によるデコイ導入の検討
ヒト舌癌培養細胞SASにおけるHVJ-liposome法によるデコイの導入効率を明らかにするため、FITCで蛍光ラベルしたNF-kappaBデコイをSAS細胞に導入した。導入24時間後にNF-kappaBデコイのSAS細胞核への導入を認めた。また1回の導入で少なくとも5日間の発現持続を認めた。
2)NF-KappaBのDNA結合能の検討
NF-kappaBデコイによるNF-kappaBのDNA結合能の抑制を検討するため、Electrophoretic mobility shift assay(EMSA)を行った。放射線照射5Gyにて、無照射群に比べNF-kappaBのDNA結合能は増加した。これに対し、NF-kappaBデコイ導入群においては、NF-kappaBの著明なDNA結合能低下を認めた。
3)アポトーシスヘの影響の検討
NF-KappaBデコイによるアポトーシス細胞の割合の変化を検討するため、アポトーシス定量化試験を行った。核の断片化・凝集を指標とし、放射線2. 5Gy・5Gy照射後の全細胞中におけるアポトーシス細胞の割合を定量化した。NF-KappaBデコイ導入群において、Scrambleデコイ導入群・HVJ-liposomeベクターコントロール群に比べ、有意なアポトーシス細胞の増加を認めた。
4)細胞増殖への影響の検討
NF-KappaBデコイによる細胞増殖への影響を検討するため、増殖阻害試験を行った。放射線2. 5Gy・5Gy照射から72時間後の細胞数の変化を検討した。NF-kappaBデコイ導入群において、Scrambleデコイ導入群・HVJ-liposomeベクターコントロール群に比べ、有意な細胞増殖の抑制を認めた。