細胞治療に用いる細胞のレクチンライブラリーによる同定と評価

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13878181
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 入村 達郎 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 教授 (80092146)
• Keywords: レクチン / 細胞治療 / プロファイリング / 線維芽細胞 / 樹状細胞 / 血管内皮細胞 / Maachia amurensis / 糖鎖

Research Abstract

萌芽的研究:細胞治療に用いる細胞のレクチンライブラリーによる同定と評価
現在までに既に得られている、新規のリコンビナント遺伝子改変Maackia amurensis hemagglutinin (MAH)の約300種のものの複数の細胞に対する結合性を半定量的に比較する方法を確立した。要約すると、これらをFLAGエピトープをN-末端側に連結させた形で発現ベクターに組み込み、大腸菌に発現させた。大腸菌のライセイトを抗FLAG抗体をコートしたマイクロタイタープレートに加えて、改変MAHのみを結合させ固相化した。抗MAH抗体の結合性を測定する事によって、リコンビナント改変MAHがその配列によらず固相化されている事を確認した。細胞を分別同定するためのモデルとして、各種動物の赤血球、ヒト大腸癌細胞を小腸上皮様に分化させた細胞、転移性の異なるマウス大腸癌細胞株などが固相化したレクチンにどの程度結合するかを定量し比較した。結合細胞数は、赤血球ではベンチジン染色により、他の細胞ではクリスタルバイオレット染色によって定量した。一部のレクチンと細胞のコンビネーションに関しては、固相化した細胞に対するレクチンの結合量と固相化したレクチンへの細胞の結合数とが対応するかどうか検討した。これらの間には相関が認められた。MAHループCの十一ケ所とループDの六ヶ所にそれぞれ1アミノ酸を挿入した改変レクチン合計340種類のうち、300種類を実際に実際にクローニングしたので、これらの細胞に対する結合性を比較した。その結果、特定の細胞に非常に特異性の高いものがあった。これらのライブラリーは、細胞治療に用いる特定の細胞を同定できるような特異性を持つレクチンを見い出すために極めて有用と考えられる。

Research Products

• [Publications] Uwatoku R. et al.: "Kupffer cell-mediated recruitment of rat dendritic cells to the liver : roles of N-acetvlgaractosamine-specific sger recerptors"Gasteroenterology. 121. 1460-1472 (2001)
• [Publications] Morimoto M. et al.: "Fibroblast migratory factor derived from mouse colon carcinoma cells : potential roles of fibronectin in tumor stroma formation"J Cell Biochem. 80. 635-646 (2001)
• [Publications] Denda-Nagai K. et al.: "MUC1 in carcinoma-host interactions"Giycoconjugate J. 17. 649-658 (2000)
• [Publications] Denda-Nagai K. et al.: "Absence of correlation of MUC1 expression to malignant behavior of renal cell carcinoma in experimental systems"Clin Exp Metastasis. 18. 71-81 (2000)
• [Publications] Kusaka Y. et al.: "Vital immunostaining of human gastric and colorectal cancer grafted into nude mice ; a preclinical assessment of a potential adjunct to videoendoscopy"J Gastroenterol.. 35. 748-752 (2000)
• [Publications] Chun K-H. et al.: "Involvement of cytokines in the skin-to-lymph node trafficking of cells of the monocyte-macrophage lineage expressing a C-type lectin."Int Immunol.. 12. 1695-1703 (2000)
• [Publications] Ichii S, et al.: "Initial steps in lymph node metastasis formation in an experimental system : possible involvement of recognition by macrophage C-type lectins"Cancer Immunol Immunother.. 49. 1-9 (2000)
• [Publications] Chun K-H. et al.: "Migration of dermal cells expressing a macrophage C-type lectin during the sensitization phase of delayed-type hypersensitivity"J Leukocte Biol.. 68. 471-478 (2000)
• [Publications] Ota M, et al.: "Involvement of cell surface glycans in adhesion of human colon carcinoma cells to liver tissue in a frozen section assay: role of…"Cancer Res.. 60. 5261-5268 (2000)
• [Publications] Koike J, et al.: "Density-dependent induction of TNF-a release from human monocytes by immobilized P-selectin."FEBS Lett. 477. 84-88 (2000)
• [Publications] Iida S, et al.: "Order and maximum incorporation of N-acetyl-D-galactosamine into threonine residues of MUC2 core peptide with microsome ..."Biochem J. 347. 535-542 (2000)
• [Publications] Kang Y, et al.: "Increased expression after X-irradiation of MUC1 in cultured human colon carcinoma HT-29 cells"Jpn J Cancer Res.. 91. 324-330 (2000)
• [Publications] Vestergaard C. et al.: "Overproduction of Th2-specific chemokines in NC/Nga mice exhibiting atopi dermatitis-like lesions"J Clin Invest.. 104. 1097-1105 (2000)
• [Publications] Nagata K. et al.: "Redistribution of selectin counter-ligands induced by cytokines."Int Immunol.. 12. 487-492 (2000)
• [Publications] Kimura T. et al.: "Epitope mapping of monoclonal antibodies specific for a macrophage lectin : a calcium-dependent epitope is in the carbohydrate recognition domain"Mol Immunol.. 37. 151-160 (2000)