2002 Fiscal Year Annual Research Report

細胞治療に用いる細胞のレクチンライブラリーによる同定と評価

Research Project

Project/Area Number	13878181
Research Institution	The University of Tokyo
Principal Investigator	入村達郎東京大学, 大学院・薬学系研究科, 教授 (80092146)
Keywords	レクチン / 細胞治療 / プロファイリング / 線維芽細胞 / 樹状細胞 / 血管内皮細胞 / Maachia amurensis / 糖鎖
Research Abstract	本研究は糖鎖認識分子であるレクチンのライブラリーをバイオインフォーマテイックスの道具として用いて細胞の分別同定を行おうとするものであり、極めて独創的なものである。特に、レクチンを固定化したものに対する細胞の結合性によって細胞の特徴を明らかにし、個々の細胞を同定できれば、細胞治療に使用するための細胞の同一性の判定基準として極めて有用であると考えられる。本年度には、Maackia amurennsis hemagglutininのループCの131及び133番目のアミノ酸を遺伝子的にランダムに改変した400個のレクチンのライブラリーからランダムにクローニングしたもの52種類(ライブラリー1)と、同じレクチンのループDの糖鎖認識部位の間(218と219、219と220、220と221、221と222、222と223、及び223と224の間)に一アミノ酸を挿入したもの合計120種類の全てをクローニングしたもの(ライブラリー2)、及び以前より得ていたループC内の6個のアミノ酸をランダムに改変したものを含むファージライブラリーからヒト赤血球に対して強い結合性を有するものを選別して得たもの10種(ライブラリー3)、を用いた。これらにFLUGタグをリンクして大腸菌に発現させ、簡便に精製する方法を確立した。一方これらの改変レクチン蛋白質を1ステップで固相化することに成功し、この表面を用いて細胞とレクチンとの相互作用を比較することを可能にした。これらの固相化した複数の改変レクチンを用いて、糖鎖認識特異性の解析を行ない、それぞれが異なる特異性を有することを明らかにした。レクチンと細胞との相互作用がこの固相化した状態で比較した。今回は、肺への転移性を異にする2種類のメラノーマ細胞(マウスB16-F1とB16-F10細胞)、肝臓への転移性を異にする2種類の大腸癌細胞(マウスcolon38及びSL4細胞)への、これらのレクチンライブラリーの結合性を比較することによって、この測定系の信頼性を検証した。ライブラリー1に対しては糖鎖結合性を持つものが多く含まれるが、これらの細胞は何れも結合性が無かった。ライブラリー2に対しては4種類の細胞に結合するものが10種類あり、何れもcolon38の結合性がSL4細胞よりも高いが、B16メラノーマ細胞バリアント間では結合性に違いがなかった。グループ3の全てのレクチンに対してB16メラノーマ細胞(F1及びF10)は高い結合性を示したが、colon38細胞及びSL4細胞は10種類中の2種類に対しては全く結合しなかった。以上のように遺伝子改変植物レクチンをライブラリーとして用いると細胞の分別同定が可能になることを、本研究によって明らかにした。

Research Products

(14 results)

All Other

All Publications (14 results)

[Publications] Higashi N: "The macrophage C-type lectin specific for galactose/N-acetylgalactosamine is endocytic receptor expressed on monocyte-derived immature dendritic cells"J Biol Chem. 277. 20686-20693 (2002)
[Publications] Bando T: "Basic studies on a labeled anti-mucin antibody detectable by infrared-fluorescence endoscopy"J Gastroenterol.. 37. 260-269 (2002)
[Publications] Onami TM: "The generation of mice deficient for the macrophage galactose and acetylgalactosamine specific lectin : limited role in lymphoid and erythroid homeostas and evidence for multiple lectins"Mol Cell Biol.. 22. 5173-5181 (2002)
[Publications] Tsuji T: "Regulation of melanoma cell migration and invasion by laminin-5 and α3β1 integrin (VLA-3)"Clin Exp Metastasis. 19. 127-134 (2002)
[Publications] Denda-Nagai K: "Macrophage C-type lectin (MGL) on bone marrow-derived immature dendritic cells involved in the recognition and internalization of glycosylated antigens"Glycobiology. 12. 443-450 (2002)
[Publications] Higashi, N: "Human macrophage lectin specific for galactose/N-acetylgalactosamine is a marker for cells at an intermediate stage in their differentiation from monocytes into macrophages"Int Immunol. 14. 545-554 (2002)
[Publications] Tsuji M: "Molecular cloning and characterization of a novel mouse macrophage C-type lectin, mMGL2, which has a distinct carbohydrate specificity from mMGL1"J Biol Chem.. 277. 28892-28901 (2002)
[Publications] Kato T: "Characterization of the primoter for the mouse a3 integrin gene: Involvement of the ets-family of transcription factors in the promoter activity"Eur J Biochem.. 269. 4524-4532 (2002)
[Publications] Takeuchi H: "The epitope recognized by the unique anti-MUC1 monoclonal antibody MY.1E12 involves sialyl α2-3galactosyl β1-3N-acetylgalactosaminide linked to a distinct threonine residue in the MUC1 tandem repeat"J Immunol Methods. 270. 199-209 (2002)
[Publications] Higashi N: "Redistribution of fibroblasts and macrophages as micrometastases develop into established liver metastases"Clin Exp Metastasis. 19. 631-638 (2002)
[Publications] Sugahara D: "Fluorescence Labeling of Oligosaccharides Useful in the Determination of Molecular Interactions"Analytical Sci.. 19. 167-169 (2002)
[Publications] Takeuchi H: "O-GalNAc incorporation into a cluster acceptor site of three consecutive threonines. Distinct specificity of GalNAc-transferase isoforms"Eur.J.Biochem.. 269. 6173-6183 (2002)
[Publications] Taki C: "MUC1 mucin expression in follicular dendritic cells and lymphoepithelial lesions of gastric mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma"Pathology Int.. 52. 691-701 (2002)
[Publications] Kamata M: "Vaccination of mice with MUC1 cDNA suppresses the development of lung metastases"Clin Exp metastasis. 19. 689-696 (2002)

2002 Fiscal Year Annual Research Report

細胞治療に用いる細胞のレクチンライブラリーによる同定と評価

Principal Investigator

入村 達郎 東京大学, 大学院・薬学系研究科, 教授 (80092146)

Research Products

[Publications] Higashi N: "The macrophage C-type lectin specific for galactose/N-acetylgalactosamine is endocytic receptor expressed on monocyte-derived immature dendritic cells"J Biol Chem. 277. 20686-20693 (2002)

[Publications] Bando T: "Basic studies on a labeled anti-mucin antibody detectable by infrared-fluorescence endoscopy"J Gastroenterol.. 37. 260-269 (2002)

[Publications] Onami TM: "The generation of mice deficient for the macrophage galactose and acetylgalactosamine specific lectin : limited role in lymphoid and erythroid homeostas and evidence for multiple lectins"Mol Cell Biol.. 22. 5173-5181 (2002)

[Publications] Tsuji T: "Regulation of melanoma cell migration and invasion by laminin-5 and α3β1 integrin (VLA-3)"Clin Exp Metastasis. 19. 127-134 (2002)

[Publications] Denda-Nagai K: "Macrophage C-type lectin (MGL) on bone marrow-derived immature dendritic cells involved in the recognition and internalization of glycosylated antigens"Glycobiology. 12. 443-450 (2002)

[Publications] Higashi, N: "Human macrophage lectin specific for galactose/N-acetylgalactosamine is a marker for cells at an intermediate stage in their differentiation from monocytes into macrophages"Int Immunol. 14. 545-554 (2002)

[Publications] Tsuji M: "Molecular cloning and characterization of a novel mouse macrophage C-type lectin, mMGL2, which has a distinct carbohydrate specificity from mMGL1"J Biol Chem.. 277. 28892-28901 (2002)

[Publications] Kato T: "Characterization of the primoter for the mouse a3 integrin gene: Involvement of the ets-family of transcription factors in the promoter activity"Eur J Biochem.. 269. 4524-4532 (2002)

[Publications] Takeuchi H: "The epitope recognized by the unique anti-MUC1 monoclonal antibody MY.1E12 involves sialyl α2-3galactosyl β1-3N-acetylgalactosaminide linked to a distinct threonine residue in the MUC1 tandem repeat"J Immunol Methods. 270. 199-209 (2002)

[Publications] Higashi N: "Redistribution of fibroblasts and macrophages as micrometastases develop into established liver metastases"Clin Exp Metastasis. 19. 631-638 (2002)

[Publications] Sugahara D: "Fluorescence Labeling of Oligosaccharides Useful in the Determination of Molecular Interactions"Analytical Sci.. 19. 167-169 (2002)

[Publications] Takeuchi H: "O-GalNAc incorporation into a cluster acceptor site of three consecutive threonines. Distinct specificity of GalNAc-transferase isoforms"Eur.J.Biochem.. 269. 6173-6183 (2002)

[Publications] Taki C: "MUC1 mucin expression in follicular dendritic cells and lymphoepithelial lesions of gastric mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma"Pathology Int.. 52. 691-701 (2002)

[Publications] Kamata M: "Vaccination of mice with MUC1 cDNA suppresses the development of lung metastases"Clin Exp metastasis. 19. 689-696 (2002)

入村達郎東京大学, 大学院・薬学系研究科, 教授 (80092146)