2013 Fiscal Year Annual Research Report
癌特異的Tenascin-C isoformを標的とする癌治療に向けた研究
| Project/Area Number |
13J11084
|
|---|
| Research Institution | Nippon Medical School |
|---|
Principal Investigator |
吉村 久志 日本医科大学, 大学院医学研究科, 特別研究員PD
|
|---|
| Keywords | H19 / long non-coding RNA / pancreatic cancer |
|---|
| Research Abstract |
細胞外基質の一つTenascin-C (Tn-C)は、癌細胞の増殖、浸潤、転移に重要よ役割を菓たすたとが明らかとなっている。しかしこれまでの我々の研究で、イヌの乳腺癌では悪性度に関わらず豊富な発現が認められた。そこで、Tn-C蛋白の産生源となる細胞を同定するため、branched DNA技術を用いた高感度in situ hybridization法と免疫組織化学の二重染色を実施した。その結果、低悪性度のイヌの乳腺癌に発現するTn-C蛋白は筋上皮細胞が産生しており、一方で高悪性度の乳腺癌のTn-C蛋白は主に癌間質の筋線維芽細胞が産生していることが明らかになった。Tn-Cには複数のsplicing isoformが存在するため、これら産生源の異なるTn-C蛋白は違った種類のisoformであり、それぞれが別の機能を有している可能性がある。
そこで次に、4種類のヒト膵癌細胞株(PK-1, PK-45H, PK-8, PANC-1)、1種類のヒト膵癌間質線維芽細胞(ACBR-1)、4種類のヒトグリオーマ細胞株(YKG-1, T98G, A172, KG-1-C)において、選択的スプライシング領域を挟むように設計したプライマーによるReverse transcription PCR (RT-PCR)法を実施した。その結果、A172を除くすべての細胞株で、すくなくとも三本のバンドが検出された。PK-1のバンドについてシークエンス解析を行った結果、選択的スプライシング領域内のすべてのドメインが欠落したisoform、すべてのドメインが保持されたisoformに加えて、すべてのドメイン新たなドメインが挿入されたisoformが存在することが明らかになった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ヒトの膵癌細胞株において、3種類のisoformが存在することが確認されたため、今後これら三つのisoformの磯能の違いを調べ、治療標的としての可能性を検討することが可能と考えている。
|
| Strategy for Future Research Activity |
今後はこれら3種類のTn-C isoformの遺伝子発現ベクターを作製し、それぞれを細胞に遺体子導入することで、細胞機能に及ぼす効果を検討する。さらにはshort hairpin RNAを用いてTn-Cの各isoformの発現をノックダウンし、癌の進行を促進するTn-C isoformを標的にした癌治療の可能性について検討を行っていく。
また、それぞれのisoformを認識する抗体を用いた免疫組織化学とそれぞれに特徴的なプローブによるin situ hybridizationを行い、ヒト膵癌におけるTn-C isoformの発現と臨床病理学的因子との関係を検討する予定である。
|
