T細胞における細胞増殖および細胞死の切り換えの制御機構

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14033215
• Research Institution: Tokyo Institute of Technology
• Principal Investigator: 片岡 孝夫 東京工業大学, 生物実験センター, 助教授 (20242307)
• Keywords: FLIP / T細胞 / アポトーシス / NF-κB / caspase-8 / zVAD-fmk

Research Abstract

FLIP(L)のT細胞における生理的機能を解析するために、マウスFLIP(L)をβ-グロビンプロモーターとヒトCD2エンハンサーエレメントを用いて過剰発現させたトランスジェニックマウスを作製した。FLIP(L)トランスジェニックマウスにおいては、FasリガンドによるT細胞のアポトーシスは抑制されていたが、T細胞のactivation-induced cell deathはあまり影響を受けなかった。また、FLIP(L)トランスジェニックマウスでは、Fasに変異が入っているlprマウスとは異なり、末梢でのB220^+CD4^-CD8^-T細胞の蓄積が認められなかった。一方、T細胞を抗CD3抗体や抗原で刺激した場合、FLIP(L)トランスジェニックマウスでは、野生型マウスに比較して、より低濃度の刺激に応答して細胞増殖やIL-2産生が亢進することが観察された。以上の結果から、FLIP(L)のin vivoにおける主要な役割は、T細胞受容体の閾値を低下させ、T細胞の増殖反応を制御していると考えられる。
HEK293T細胞にFLIP(L)を過剰発現させると、転写因子NF-κBが活性化され、この活性化はcaspase阻害剤zVAD-fmkで阻害される。この実験結果は、FLIP(L)によるNF-κBの活性化にはcaspase-8の活性化が必要であることを示唆している。FLIP(L)のcaspase-8の切断型であるFLIP(p43)およびFLIP(p12)を作製し、κB配列応答性ルシフェラーゼと共発現させたところ、FLIP(p43)でのみ、FLIP(L)と同程度のNF-κB活性化が観察された。また、FLIP(p43)によるNF-κBの活性化はzVAD-fmkに非感受性であった。以上の結果から、FLIP(L)によるNF-κBの活性化には、FLIP(L)がcaspase-8によって切断されることが重要であることが示唆された。ヒト末梢T細胞の増殖やIL-2産生は、caspase阻害剤によって抑制されることから、FLIP(L)のcaspase-8による切断が増殖シグナルに関与していると考えられる。

Research Products

• [Publications] Susanne M.A.Lens: "The caspase 8 inhibitor c-FLIP_L modulates T-cell receptor-induced proliferation but not activation-induced cell death of lymphocytes"Molecular and Cellular Biology. 22. 5419-5433 (2002)
• [Publications] Izuru Ando: "Safflower polysaccharides activate the transcription factor NF-κB via Toll-like receptor 4 and induce cytokine production by macrophages"International Immunopharmacology. 2. 1155-1162 (2002)
• [Publications] 片岡 孝夫: "T細胞による細胞殺傷機能発現の制御機構に関する研究"日本農芸化学会誌. 76. 922-929 (2002)
• [Publications] Masashige Bando: "The mycotoxin penicillic acid inhibits Fas ligand-induced apoptosis by blocking self-processing of caspase-8 in death-inducing signaling complex"Journal of Biological Chemistry. 278. 5786-5793 (2003)
• [Publications] Yasunobu Miyake: "Epoxycyclohexenone inhibits Fas-mediated apoptosis by blocking activation of pro-caspase-8 in the death-inducing signaling complex"Journal of Biological Chemistry. 278. 11213-11220 (2003)
• [Publications] Takao Kataoka: "Molecular Anatomy of Cellular Systems"Elsevier Science B.V.. 11 (2002)