2002 Fiscal Year Annual Research Report

マウス初期胚におけるp53依存性S期抑制と放射線誘発非標的・遅延ゲノム不安定性

Research Project

Project/Area Number	14208067
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	丹羽太貫京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (80093293)
Keywords	p53 / ATM / NBS / Sチェックポイント / PCNAフォーカス
Research Abstract	照射精子受精卵において見られるS期チェックポイントについて、p21欠失マウス受精卵を用いて検討し、これが存在することを明らかにした。ATM欠損マウス卵ではこれは見られなかった。この現象に関わるp53タンパクの機能ドメインを明かにするため、各種のリン酸化部位に変異を導入したp53タンパクを大腸菌で作らせて、これを微小注入でp53-/-照射精子受精卵に導入してその効果を解析した。その結果、転写活性化ドメインにはこの抑制機能が無いこと、DNA結合部位にこの機能が見られること、が明らかになった。受精卵を試験管として用いる解析の長所は多くあるが、同時に技術的に困難な点が短所である。このため、培養細胞で同様にp53依存性Sチェックポイントが存在するか否かを検討した。p53+/+マウス繊維芽細胞とp53-/-、ATM-/-、NBS1-/-など各種のマウス繊維芽細胞について解析した結果、p53依存性Sチェックポイントが、2Gy以下の低線量放射線照射でのみ見られること、NBS1が高線量域で機能していること、ATMがその両方に関わっていること、が明かになった。照射培養細胞についてDNA損傷部位に集積することで知られているH2AXとリン酸化p53の核内の局在を調べたところ、両者は一致せず、リン酸化p53は損傷部位以外にあることが明かになった。p53がSチェックポイントに機能することから、これとDNA合成との関係を調べる目的で、複製点に局在するPCNAとの関係を調べた。野生型の細胞においては照射後にPCNAはフォーカスを形成し、同時にDNA合成速度が低下する。一方p53-/-細胞ではこのフォーカスが見られないのみか、PCNAが核に存在しなくなる。これにともなってDNA合成速度は低下せず、またPCNAの染色がない細胞でもBrdUrdの取込がみとめられる。以上から、p53はATMの下流で機能し、PCNAの安定性を増すことでDNA合成を抑制する、という機構が明らかになった。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] 丹羽太貫: "Bcl11b is required for differentiation and survival of αΒ T lymphocytes"Nature Immunology. (in press).
[Publications] 丹羽太貫: "Mapping of genetic modifiers of thymic lymphoma development in p53-knockout mice"Oncogene. 22. 1098-1102 (2003)
[Publications] 丹羽太貫: "Homologous deletions and poit mutations of the Rit1/Ncl11b gene in γ-ray induced mouse thymic lymphomas"Biochem.Biophys.Res.Commu. 301. 598-603 (2003)
[Publications] 丹羽太貫: "Novel surveilance of the 53-depenent S checkpoint ensures chromosome damage repair and development of mouse embryos fertilized with X-irradiated sperm"Radiat. Res.. 158. 735-742 (2002)
[Publications] 丹羽太貫: "Persistent induction of somatic reversions of the pink-eyed unstable mutation in F1 mice born to fathers irradiated at the spermatozoa stage"Radiat. Res.. 157. 661-667 (2002)
[Publications] 丹羽太貫: "p53 dependent S phase damage checkpoint and pronuclear crosstalk in mouse zygotes with X-irradiated sperm"Mol. Cell. Biol.. 22. 2220-2228 (2002)

2002 Fiscal Year Annual Research Report

マウス初期胚におけるp53依存性S期抑制と放射線誘発非標的・遅延ゲノム不安定性

Principal Investigator

丹羽 太貫 京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (80093293)

Research Products

[Publications] 丹羽太貫: "Bcl11b is required for differentiation and survival of αΒ T lymphocytes"Nature Immunology. (in press).

[Publications] 丹羽太貫: "Mapping of genetic modifiers of thymic lymphoma development in p53-knockout mice"Oncogene. 22. 1098-1102 (2003)

[Publications] 丹羽太貫: "Homologous deletions and poit mutations of the Rit1/Ncl11b gene in γ-ray induced mouse thymic lymphomas"Biochem.Biophys.Res.Commu. 301. 598-603 (2003)

[Publications] 丹羽太貫: "Novel surveilance of the 53-depenent S checkpoint ensures chromosome damage repair and development of mouse embryos fertilized with X-irradiated sperm"Radiat. Res.. 158. 735-742 (2002)

[Publications] 丹羽太貫: "Persistent induction of somatic reversions of the pink-eyed unstable mutation in F1 mice born to fathers irradiated at the spermatozoa stage"Radiat. Res.. 157. 661-667 (2002)

[Publications] 丹羽太貫: "p53 dependent S phase damage checkpoint and pronuclear crosstalk in mouse zygotes with X-irradiated sperm"Mol. Cell. Biol.. 22. 2220-2228 (2002)

丹羽太貫京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (80093293)