2005 Fiscal Year Annual Research Report
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14360191
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| Research Institution | Osaka Prefecture University |
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Principal Investigator |
稲葉 俊夫 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 教授 (00137241)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
杉浦 喜久弥 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 助教授 (30171143)
熊谷 大二郎 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 助手 (70316016)
谷 浩行 大阪府立大学, 生命環境科学研究科, 助手 (00305658)
鳥居 隆三 滋賀医科大学, 動物生命科学研究センター, 教授 (50106647)
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| Keywords | イヌ / ES細胞 / 卵子 / 体外成熟 / 体外受精 / 胎子線維芽細胞 / エストロジェン / 上皮成長因子 |
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| Research Abstract |
イヌES細胞株樹立を支える関連技術として、卵胞内未成熟卵子を体外で成熟させる方法、および体外受精の技術開発を試みた。さらに、イヌ受精卵からES細胞株の分離方法、特性の解析および継代方法の検討を行い、以下の結果を得た。
1.エストロジェンおよび上皮成長因子は卵子と卵丘細胞の相互に働き、卵子の第一減数分裂中期までの成熟を促進するが、両者だけでは第二減数分裂中期(MII)への成熟を促進しないことが明らかとなった。
2.イヌあるいはマウス胎子線維芽細胞と共培養することにより、卵子のMIIへの成熟、および体外受精後の前核形成率および胚の発育は促進され、イヌ胎子線維芽細胞群では16細胞期、マウス胎子線維芽細胞群では桑実胚までの受精卵を得ることができた。
3.イヌES様細胞の初代コロニー形成率は、桑実胚0%、胚盤胞期胚25.6%、脱出胚盤胞期胚67.9%であり、脱出胚盤胞期胚からES様細胞を効果的に分離・培養できることが分かった。
4.イヌES様細胞は強いアルカリ性ホスファターゼ活性を有しており、胚性抗原のSSEA-1や、遺伝子の転写因子であるOct-4など陽性を示し、浮遊培養によって嚢胞状の胚様体を形成することから、マウスES細胞と同様の性状を示すことが分かった。また胚様体の接着培養により、神経様細胞、上皮様細胞、線維芽様細胞、および拍動する心筋様の細胞群が観察された。
5.コラゲナーゼ処理によるイヌES様細胞の継代では3代目にはすべてのコロニーが分化・死滅したが、物理的継代では2つのcell-lineが8代目まで未分化な状態を維持できた。
以上の結果のように、胎子線維芽細胞との共培養により、イヌ卵子を体外成熟および受精させて桑実胚を得ることができた。また、イヌES様細胞は脱出胚盤胞期胚から高率で分離でき、その継代には物理的な方法が良いことが明らかとなった。
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