2002 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
14370061
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
|
| Research Institution | Kumamoto University |
|---|
Principal Investigator |
山泉 克 熊本大学, 発生医学研究センター, 教授 (70107093)
|
|---|
| Keywords | ヒトRAD18 / 複製後修復 / ゲノム不安定性 / 組換え / XPV / 相補性テスト |
|---|
| Research Abstract |
Rad18タン白の機能を調べる目的から常法に従って、RAD18ノックアウトマウスES細胞を作製した。アルカリ蔗糖密度勾配遠心法で複製後修復に異常のあることおよび種々のDNA損傷に対し感受性が増大することが確認された。誘発突然変異への影響をみるため、UV、MMS処理後のウアバイン耐性細胞の出現頻度を調べたところ、いずれの場合にも、変異頻度は上昇するものの野生株以上の変異頻度は認められなかった。ノックアウトES細胞では自然発生及び変異原処理後の姉妹染色分体交換が正常細胞と比較して3倍上昇していた。これらのノックアウトES細胞では外来性のDNAが組み込まれやすく、しかも相同組換えの頻度が1桁上昇することがわかった。これらの結果から高等真核細胞においても我々の単離したRad18タン白が複製後修復に関与し、その欠損に伴いゲノム不安定性の表現型が生じること、およびRad18は何らかの機構で組換えを抑制していることが明らかとなった。
Rad18欠損細胞とvariant型xeroderma pigmentosum (XPV)細胞間には共通して複製後修復異常が認められる。今回RAD18ノックアウト細胞でのUV感受性がXPV同様カフェインで増強されることを見出した。株化したXPV細胞も種々のDNA損傷に対して感受性を示す。従って、両者の細胞レベルでの特長はほぼ同一であることから、XPVと診断された患者中にRad18欠損例が含まれている可能性が考えられる。そこでRad18欠損株とXPV細胞間で雑種細胞を作り相補性テストを試みたところ、これらの雑種細胞はいずれの親細胞よりもUV抵抗性となることが判明した。以上より、RAD18異常とXPV細胞の表現型は酷似するものの、相補性テストで両者は区別できることが明らかとなった。
|
-
[Publications] Ren., Y., et al.: "Three novel mutations responsible for Cockayne syndrome group A"Genes & Genetic Systems. (in press).
-
[Publications] Tateishi, S., et al.: "Enhanced genomic instability and defective postreplication repair in RAD18 knockout mouse embryonic stem cells"Molecular and Cellular Biology. 23(2). 474-481 (2003)
-
[Publications] Okada, T., et al.: "Involvement of verebrate Polκ in Rad18-independent postreplication repair of UV damage"Journal of Biological Chemistry. 277(50). 48690-48695 (2002)
-
[Publications] Yamashita, Y.M., et al.: "RAD18 and RAD54 cooperatively contribute to maintenance of genomic stability in vertebrate cells"EMBO Journal. 21(20). 5558-5566 (2002)
-
[Publications] 立石 智, 山泉 克: "損傷トレランスとRAD6エピスタシス遺伝子群(Tolerance of DNA damage and RAD6 epistasis group)"蛋白質 核酸 酵素. 46(8). 1116-1123 (2001)
