2003 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子繰作によるロタウイルスの感染性粒子形成のための系の開発
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14370105
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
谷口 孝喜 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (40094213)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
守口 匡子 藤田保健衛生大学, 医学部, 助手 (60298528)
前野 芳正 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (70131191)
佐々木 潤 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (70319268)
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| Keywords | ロタウイルス / 人工感染粒子 / リバースジェネテックス / リアソートメント / トリプシン依存性 / キメラウイルス |
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| Research Abstract |
1.材料として、1)ウイルス蛋白質供給系として、pCAGGSベクターにVP1,VP2,VP3,VP4,VP6,VP7,NSP1,NSP2,NSP3,NSP4,NSP5をそれぞれ挿入した。2)ウイルスゲノムRNA供給系として、pT7ベクターにVP1,VP2,VP3,VP4,VP6,VP7,NSP1,NSP2,NSP3,NSP4,NSP5をそれぞれ挿入した。3)T7RNAPol供給系として、T7RNAPol/pCAGGSとワクシニアベクターのrDIS-T7Polを作成した。
2.293T細胞にトランスフェクト後、ウイルス構造タンパク質VP2,VP4,VP6,VP7の発現を確認した。VP1,VP3の発現はきわめて微少であった。
3.1)の11種および2)の11種すべてと、T7RNAPol/pCAGGSをマイクロインジェクションあるいはトランスフェクションし、ウイルスの回収を試みたが、結果はネガティブであった。
4.あらかじめpCAGGS-VP1,VP2,VP3,VP6を293T細胞にオープンコア由来のウイルスゲノムRNAをマイクロインジェクションあるいはトランスフェクションし、ウイルスの回収を試みたが、結果はネガティブであった。
5.pT7ベクターにSV40 oriの導入、およびPAM8-1、pQBIT7-GFPの利用の検討を進めている。
6.NSP1遺伝子の変異株A5-10またはA5-16によるNSP1遺伝子の入れ替えを試みた。pT7-A5-10 5'-500-IRES-GFP-rzm、pT7-A5-10 5'-UTR-GFP-rzm、pT7-A5-10-NSP1-GFPfusion--rzm、pT7-A5-16 5'-NSP1-IRES-GFP-rzm、を作成し、mA104細胞にトランスフェクトし、A5ウイルスを接種後、ウイルスの回収を試みたが、現在のところ、結果はネガティブであった。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Higo-Moriguchi K: "Isolation of human monoclonal antibodies neutralizing human rotaviruses"Journal of Virology. 78・7. 3325-3332 (2004)
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[Publications] Ahmed UA: "Genetic analysis of group B human rotaviruses detected in Bangladesh in 2000 and 2001"Journal of Medical Virology. 72・1. 149-155 (2004)
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[Publications] Wakuda M: "Serological and genomic characterization of a G12 human rotavirus in Thailand"Journal of Clinical Microbiology. 41・12. 5764-5769 (2003)
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[Publications] Sasaki J: "The Aichi virus leader protein is involved in viral RNA replication and encapsidation"Journal of Virology. 77・11. 10799-10807 (2003)
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[Publications] Nagashima S: "Functional analysis of the stem-loop structures at the 5' end of the Aichi virus genome"Virology. 313・1. 56-65 (2003)
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[Publications] Adah MI: "Close relationship between G8 bovine and human rotaviruses isolated in Nigeria"Journal of Clinical Microbiology. 41・8. 3945-3950 (2003)
