2003 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
14370544
|
|---|
| Research Institution | Yamaguchi University |
|---|
Principal Investigator |
山下 裕司 山口大学, 医学部, 教授 (00210419)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中井 彰 山口大学, 大学院・医学研究科, 教授 (60252516)
|
|---|
| Keywords | 胚性幹細胞 / 内耳器官培養 / 分化 |
|---|
| Research Abstract |
マウスの胚性幹細胞に,green fluorescent protein (GFP)遺伝子をもつベクター(pcDNAneo3.1/GFP)をtransfectionさせ,蛍光下で緑色に発色する胚性幹細胞を作成した.そして,この細胞を蝸牛器官培養と共培養させるにあたり,hanging drop法を用いて胚様体を分化させる手技を確立した.蝸牛器官培養は,生後6日のマウスの側頭骨を摘出し,蝸牛骨壁を除去,血管条,らせん靭帯,蝸牛軸などをはずし,コルチ翠を取り出した.組織の摘出は,すべてクリーンベンチの中で,清潔操作で行った.コルチ器は,培養液(DMEM F12)に浸し,37度,5%CO2の環境下で培養を行った.胚様体は,胚性幹細胞をleukemia inhibiting factor (LIF)の非存在下にin vitroで分化させて得られ,3胚葉いずれにも分化する能力を持つ.我々は,蛍光下で緑色に発色する胚性幹細胞を胚様体にまで分化させた.その胚様体を一度トリプシン処理して細胞を分離させた後,蝸牛器官培養の皿へ添加して共培養した.共培養を開始して,1,3,7日目の蝸牛を4%パラホルムアルデヒドを用いて1時間,4度で固定した.そして,その生着部位,およびその分化傾向について,surface preparation法,プラスチック包埋による薄切標本を用い,免疫組織学的検討を行った.胚性幹細胞の分化マーカーとして,Myosin Vllaa, Calbindin, Neurofilament等の抗体を用いた.
|
Research Products
(7 results)
-
[Publications] Osamu Horiike, et al.: "Protective effect of edaravone against streptomycin-induced vestibulotoxicity in the guinea pig"European Journal of Pharmacology. 464. 75-78 (2003)
-
[Publications] Kazuma Sugahara, et al.: "Heat shock transcription factor HSF1 is required for survival of sensory hair cells against acoustic overexposure"Hearing Research. 182. 88-96 (2003)
-
[Publications] Takeshi Okuda, et al.: "Inner ear changes with intracochlear gentamicin administration in guinea pigs"The Laryngoscope. (in press). (2004)
-
[Publications] Tsuyoshi Takemoto, et al.: "The clinical free radical scavenger, edaravone, protects cochlear hair cells from acoustic trauma"European Journal of Pharmacology. 487. 113-116 (2004)
-
[Publications] 山下裕司: "内耳再生医療"最新医学. 58. 748-757 (2003)
-
[Publications] 奥田 剛, 他: "ゲンタマイシン内耳障害におけるcaspase inhibitor直接投与の効果"頭頸部自律神経. 17. 40-42 (2003)
-
[Publications] 竹本 剛, 他: "音響傷害における抗酸化剤エダラボン直接投与の保護効果"頭頸部自律神経. 17. 43-46 (2003)
