2003 Fiscal Year Annual Research Report
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14370759
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
小田切 優樹 熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 教授 (80120145)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
野崎 周英 化学及血清療法研究所, 菊池研究所, 室長
棚瀬 純男 熊本大学, 医学部, 教授 (20112401)
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| Keywords | 遺伝子組換え体 / アルブミン製剤 / 抗酸化能 / 血中滞留性 / 体内動態 / 機能特性 / 構造特性 |
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| Research Abstract |
本研究は、当研究室において構築された遺伝子組換え技術を基に、アルブミン本来の役割である浸透圧維持作用に加え、抗酸化能や血中滞留性などの付与された安全性、有効性かつ経済性に優れた機能性アルブミン製剤を開発することを目的として実施され、以下の知見が得られた。
1.in vitroにおいて、HSAの抗酸化能を担うアミノ酸残基としてCys及びMetに着目し、変異体を作製し、これら変異体の抗酸化活性を野生型と比較検討したところ、^<34>Cys、^<123>Met及び^<548>Metが抗酸化アミノ酸残基として重要な役割を担っていることが明らかとなった。特に、遊離のCysの重要性が示唆されたことから、ジスルフィド結合を形成している^<177>Cysと^<168>Cysにおいて、^<168>CysをPheに変異させることにより切断し、遊離のCysを増加させた変異体を作製したところ、野生型の2倍の抗酸化活性を示した。
2.各種変異体の二次構造を反映する遠紫外領域のCDスペクトルを測定したところ、Cysを増加させた変異体を除いて野生型とほぼ同一のスペクトルを示した。しかし、Cysを増加させた変異体においては、ジスルフィド結合切断による構造変化が観察された。
3.^<111>In標識した野生型及び各種変異体のマウスでの体内動態特性を検討した結果、その血漿中濃度推移の減衰過程はすべての変異体において二相性を示し、野生型に比べ、比較的早い消失傾向が認められた。特に、Cysを増加させた変異体においては、先の構造変化を反映して生体内からの明らかに素早い消失が認められた。
以上のように興味ある知見は得られたものの、機能性に優れたアルブミンを見出すにはいたらず、今後、更なる検討を要することになった。
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[Publications] 安楽 誠, 小田切優樹(他7名): "Intravenous iron administration induces oxidation of serum albumin in hemodialysis patients"Kidney International. 66(In press). (2004)
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[Publications] 櫻井祐治, 小田切優樹(他6名): "Esterase-like activity of serum albumin : Characterization of its structural chemistry using p-nitrophenyl esters as substrates"Pharmaceutical Research. 21. 285-292 (2004)
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[Publications] 出口恒夫, 小田切優樹(他4名): "Characterization of uremic toxin transport by organic anion transporters in the kidney"Kidney International. 65. 162-174 (2004)
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[Publications] 中城圭介, 小田切優樹(他4名): "The effect of glycation on the structure, function and biological fate of human serum albumin as revealed by recombinant mutants"Biochimica Biophysica Acta. 1623. 88-97 (2003)
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[Publications] 徳富芳子, 小田切優樹(他4名): "Effects of alpha(1)-acid glycoprotein on isometric tension of mouse aorta"European Journal Pharmacology. 477. 137-141 (2003)
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[Publications] 安楽 誠, 小田切優樹(他5名): "Validation of the chloramine-T induced oxidation of human serum albumin as a model for oxidative damage in vivo"Pharmaceutical Research. 20. 684-692 (2003)
