組換え林木をもちいたフェノール系環境汚染物質の浄化

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14380271
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 木村 哲哉 三重大学, 生物資源学部, 助教授 (00281080)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 粟冠 和雄 三重大学, 生物資源学部, 助教授 (20154031)
• Keywords: クロロカテコール / ポプラ

Research Abstract

汚染物質を土壌から除去するコストの低い方法の開発が望まれている。そこで、環境に適応して様々な代謝能力を持つ微生物を利用して汚染物質を分解除去することが考えられているが広大な土地に寿命の短い微生物を定着させて、その機能を十分に発揮させるためには、培養条件を整える必要があり、経済的にも効率のよいものではない。そこで、微生物に代わって林木にこの機能を発現させることを企てた。林木は土壌中の栄養源を利用して、長時間にわたって光合成を進め生命活動を維持することから、ここに汚染物質分解酵素や汚染物質を無毒化する酵素の遺伝子を発現させれば、持続的に分解が進むことになる。本研究では有機塩素系化合物の微生物分解過程で生じるクロロベンゾエートを分解する土壌細菌から、これらの分解系遺伝子をポプラに導入し発現させた。土壌細菌がもつクロロカテコールを酸化する反応を触媒する酵素をコードする遺伝子(クロロカテコールジオキシゲナーゼcbnA遺伝子とクロロムコネートシクロイソメラーゼcbnB遺伝子)を高発現型CaMV35Sプロモーター下流につないで、アグロバクテリウム法でポプラに導入し形質転換体を作出した。この形質転換体について、遺伝子が導入されていることをPCR法で確認し、cbnA遺伝子が発現していることをウエスタンブロッティング法で確認した。また形質転換体よりカルスを誘導して、これらとクロロカテコールをインキュベートし、クロロカテコールの分解を定性的に確認した。