2002 Fiscal Year Annual Research Report
癌抑制遺伝子産物の分解亢進を介した細胞悪性化の分子機構
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14380304
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
北川 雅敏 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50294971)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北川 恭子 浜松医科大学, 医学部, 助手 (20299605)
内田 千晴 浜松医科大学, 医学部, 助手 (60223567)
小田 敏明 浜松医科大学, 医学部, 助教授 (90126805)
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| Keywords | p27^<Kip1> / RBタンパク質 / 癌 / ユビキチン / 細胞周期 |
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| Research Abstract |
[研究目的] 本研究では、癌抑制遺伝子産物の分解亢進による細胞悪性化機構の解明を目指す。特にRB経路を制御する癌抑制遺伝子産物RBタンパク質とCDJ阻害タンパク質p27^<Kip1>の細胞内での分解機構を明らかにする。さらに、これらの癌抑制遺伝子産物の分解実行因子の発現亢進や、分解亢進に伴い発現が変化する細胞悪性化や予後不良のキー遺伝子を解明することを目指す。
[方法と結果]
(1)RBタンパク質のユビキチン化:RBタンパク質のユビキチン化を解析するためにin vivoおよびin vitroアッセイを構築した。この細胞内および再構成系でMdm2はRBタンパク質と結合してRBタンパク質を効率よくユビキチン化した。興味深いことにMdm2はRBファミリーの中でRBタンパク質だけを特異的にユビキチン化した。また、ARFはRBタンパク質のユビキチン化を抑制した。細胞にMdm2を過剰発現するとRBタンパク質の分解速度が亢進し、プロテアソーム阻害剤やドミナントネガティブMdm2で分解が阻害されることがわかった。さらにSaO2細胞を用いたRB経路の機能アッセイで、Mdm2によりRB経路が抑制されることが判明した。
(2)p27^<Kip1>の分解制御機構:p27^<Kip1>の分解制御にかかわるリン酸化部位Ser10を含むN末端領域をBaitとしYeast Two-hybridスクリーニングを行った。その結果数種の結合タンパク質を黒にーングすることに成功した。今後はさらに機能解析を進める予定である。
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[Publications] Uchida, C. et al.: "The role of Sp1 and Ap-2 in basal and protein kinase A-induced expression of mitochondrial serine : pyruvate aminotransferase in hepatocytes"Journal of Biological Chemistry. 277. 39082-39092 (2002)
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[Publications] Mizuno, T., et al.: "Analyses in transfected cells and in vitro of a putative peroxisomal targeting signal of rat liver serine : pyruvate aminotransferase"Histochem. Cell Biol.. 118. 321-328 (2002)
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[Publications] Matsumoto A. et al.: "Bisphenol a levels in human urine"Environ. Health Perspect.. 111. 101-104 (2003)
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[Publications] Katayama, K. et al.: "Cdk4/Cyclin D1 kinase, a universal and critical regulator of apoptosis"Anticancer Res.. 23. 235-244 (2003)
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[Publications] Inui, N. et al.: "High expression of Cks1 in human non-small cell lung carcinomas"Biochem. Biophys. Research. Communication. 303. 973-984 (2003)
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[Publications] Isse, T. et al.: "Diminished alcohol preference in transgenic mice lacking aldehyde dehydrogenase activity"Pharmacogenetics. 12. 621-626 (2002)
