哺乳類精原細胞の増殖分化に関連する特異的遺伝子発現の解析

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14560231
• Research Institution: IBARAKI UNIVERSITY
• Principal Investigator: 金澤 卓弥 茨城大学, 農学部, 助手 (70272119)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 後藤 英夫 独立行政法人農業生物資源研究所, 生体防御研究グループ 疾患モデル動物研究チーム, チーム長 (70211919) ; 小川 泰善 茨城大学, 農学部, 助教授 (00302331)
• Keywords: 雄性生殖細胞 / 差次的遺伝子発現 / 精巣 / 哺乳動物 / 蛍光抗体組織染色法 / 単クローン抗体

Research Abstract

(1)精原細胞増殖再開期に発現する遺伝子の転写物の検出およびcDNA断片の塩基配列決定
生後1週齢および2週齢のマウスからそれぞれ精巣を摘出し、これをホモジナイズしてAGPC法により総RNAを抽出し、高速冷却遠心機により分離した。総RNAを鋳型として4種類のアンカーオリゴdTプライマーを用いて逆転写反応を行い、cDNA断片を作製した。次に、4種類それぞれの逆転写反応産物について10種類の任意(arbitrary)プライマーを用いてPCRを行い、cDNA断片を増幅した。このPCR産物をゲル電気泳動で展開し、時期特異的に検出される約10種類のバンドを切り出してcDNA断片を精製した。精製したcDNA断片をジデオキシ法により塩基配列を読みとり、100〜300塩基対からなる数種類のcDNAの塩基配列を決定した。相同性検索の結果、多くは既に報告されているものと一致したが、2種類は未報告の塩基配列であることが判明した。
(2)ヤギ精巣細胞特異的単クローン抗体を用いた免疫染色法によるマウス精巣構成細胞の同定
既に作出している一連のヤギ精巣細胞特異的単クローン抗体がマウス精巣構成細胞の同定に有用か否かをマウス精巣組織より作製した凍結組織切片を用いて、間接二重蛍光抗体法により調べた。その結果、ヤギのライディッヒ細胞様細胞およびセルトリ細胞様細胞をそれぞれ認識するもの、精原細胞様細胞を認識するもの、精母細胞様細胞、精子細胞様細胞、および精子の頭部あるいは尾部をそれぞれ特異的に認識する抗体のなかで、マウスにおいても有用であるものが約10種類確かめられた。

Research Products

• [Publications] Takuya Kanazawa: "Immunohistochemical characterization of a library of monoclonal antibodies newly generated against goat testicular cells"Biol.Reprod.. 68・S1. 193 (2003)
• [Publications] Takuya Kanazawa: "Immunohistological characterization of goat testis cells using newly generated monoclonal antibodies"Zool.Sci.. 20・12. 1555 (2003)
• [Publications] Gotoh H, Matsumoto Y, Imamura K: "General anesthesia of infant mice by isoflurane inhalation for mediumduration surgery"Exp.Anim. 53・1. 63 (2004)