2002 Fiscal Year Annual Research Report
コラーゲン刺激によるDDR2レセプターシグナル伝達およびその機能解析
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14570022
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| Research Institution | Osaka City University |
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Principal Investigator |
池田 一雄 大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (80275247)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
河田 則文 大阪市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (30271191)
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| Keywords | 肝星細胞 / DDR2 / コラーゲン |
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| Research Abstract |
DDR2は、RTKの一つで、そのligandがコラーゲンであることが最近明らかとなったが、今回、そのシグナル伝達ならびにその機能について解析した。まず最初に、肝星細胞を用い、コラーゲン刺激によりDDR2がリン酸化するかどうか確かめた。抗DDR2抗体による免疫沈降(IP)の後、Western Blot (WB)によって、星細胞は、DDR2を発現し、刺激によりDDR2が、リン酸化されることが明らかとなった。興味深いことに、IP-WBにより、SrcがDDR2と結合した。さらに、Src kinase inhibitor PP1やDominant negative Srcにより、DDR2のリン酸化は抑制された。続いて、DDR2に結合するその他の分子を同定するため、Src kinaseの存在下にYeast Two Hybridを行ったところShcが、DDR2と結合した。DDR2ノックアウトマウスから分離したskin fibroblastにwild type DDR2 (WT)もしくは、kinase dead DDR2mutantを組み込んだcell linesを使用し、IP-WBを行ったところ、WT-DDR2が、コラーゲン刺激によりリン酸化されるとShcとbindすることが明らかとなった。さらに、MMP-2の発現が、Src kinaseを含むDDR2 signalingによって誘導されるかどうかをMMP-2のpromoter assayを用いて検討した。DDR2 +/-cellで認められるMMP-2のpromoter activityは、DDR2 -/-cellで抑制され、さらに、active SrcによりMMP-2 promoter activityは上昇し、DN Srcにより抑制された。以上より、DDR2は、Src kinaseとの相互作用により、そのシグナル伝達が制御されることが明らかとなった。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Saxena N.K.et al.: "Leptin in Hepatic Fibrosis : Evidence for Increased collagen Production in Stellate Cells and Lean Littermates of ob/ob Mice"Hepatology. 35. 762-771 (2002)
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[Publications] Ikeda K. et al.: "Discoidin Domain Receptor 2 Interacts with Src and Shc following Its Activation by Type I Collagen"The Journal of Biological Chemistry. 277・21. 19206-19212 (2002)
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[Publications] Nakatani K. et al.: "Expression of SPARC by activated hepatic stellate cells and its correlation with the stage of fibrogenesis in human chronic hepatitis"Virchows Arch. 441. 466-474 (2002)
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[Publications] Sato E.F.et al.: "Oxidative stress-induced cell death of human oral neutrophils"Am. J. Physiol. Cell Physiol.. 284・4. C1048-C1053 (2003)
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[Publications] Kobayashi S. et al.: "Induction of activated T-cell apoptosis in the fibrotic tissue of the rat liver : Possibe involvement of activated hepatic stellate cells and fibroblasts"Cell Tissue Research. (in press). (2003)
