2002 Fiscal Year Annual Research Report
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14570122
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
後藤 信治 長崎大学, 医学部, 助手 (50186889)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
近藤 宇史 長崎大学, 医学部, 教授 (00158908)
井原 義人 長崎大学, 医学部, 助教授 (70263241)
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| Keywords | glutathione S-transferase π / doxorubicin / cisplatin / nuclear translocation / apoptosis |
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| Research Abstract |
グルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)のサブクラスのひとつであるGSTπは、癌細胞の薬剤感受性に深く関与することが知られている。申請者らは、GSTπの細胞内局在と抗癌剤感受性との関連性を検討した結果、核内に存在するGSTπが、薬剤のDNAへの作用を阻害し、癌細胞の薬剤感受性を低下させていることを明らかにした。しかし、GSTπの核移行機構は全く不明である。そこで、14年度の目的を、GSTπの核移行の分子機構を解明することとして研究を行った。
1.核移行に必須なGSTπの領域を明らかにする。
(1)GSTπのcDNAをN末端領域(GSTπ1)、中央領域(GSTπ2)、C末端領域(GSTπ3)の3領域に分割して、それぞれを緑色蛍光タンパク質(GFP)との融合タンパク質を発現させるベクターに組み込み、GSTπ1-GFP、GSTπ2-GFP、GSTπ3-GFPを作製した。これらのベクターを大腸癌細胞(HCT8)に導入して、融合タンパク質を発現させようと試みたが、HCT8細胞では、これらの融合タンパク質は、安定的に発現しなかった。
(2)次に、安定的に外来性のタンパク質を発現することができるCOS-1細胞の使用を計画した。まず、融合タンパク質の発現に先がけて、COS-1の内在性のGSTπの発現を細胞免疫染色法で検討したところ、細胞質と核に存在することが観察された。この結果によって、COS-1細胞にもGSTπの核移行機構が存在することが示唆されたので、GSTπの核移行機構を検討するために、COS-1細胞を使用することとした。
(3)現在、GSTπ1-GFP、GSTπ2-GFP、GSTπ3-GFPをCOS-1に導入して、融合タンパク質を安定的に発現するクローンを選別している。
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