2002 Fiscal Year Annual Research Report

MRP1トランスポータの薬剤輸送の機構と構造変化の解析

Research Project

Project/Area Number	14570123
Research Institution	Kagoshima University
Principal Investigator	古川龍彦鹿児島大学, 医学部, 助教授 (40219100)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	中島融一鹿児島大学, 医学部, 研究機関研究員
Keywords	MRP1 / 抗癌剤 / 多剤耐性
Research Abstract	Agosterol-A(AG-A)は我々が見いだしたMRP1(multidrug resistance protein)の新規な阻害剤であり、その光親和性誘導体AzidoAG-Aを合成して研究を行ってきた。これまでにMRP1をグルタチオン(GSH)依存的に光標識すること、AzidoAG-Aの標識はMRP1の基質抗癌剤で阻害されること、GSHとMRP1との反応に最初の長い細胞質内部分L_0が重要であることをすでに報告した。多くの抗癌剤、化学物質がGSH依存的に細胞外に輸送されることが、あきらかである。そこで今回さらに詳細にGSH依存的な輸送の機構を解明するために、欠失変異体、点変異体のMRP1を作成しバキュロウイルス発現系を用いて解析した。欠失変異体とdual expressionのMRP1を用いた結果から、アミノ酸1223と1295の間の部分はそれ自身光標識されないがAzidoAG-Aの結合に重要であることが明らかになった。そこでこの部分の1249番目の酸性アミノ酸ルギニンの点変異体MRP1を作成して調べた。AzidoAG-Aで光標識されず、LTC4の輸送能がなくVCRに対する耐性もなかった。このことから1249番目アルギニンがMRP1の輸送活性に重要であることが分かった。一方、欠失変異体MRP1を用いた結果からAzidoAG-Aが共有結合を行うアミノ酸は932と1222の間にあることがあきらかとなった。この部分の1202のアルギニンに相当するMRP2の変異体はトランスポータ活性が消失することが報告されている。そこで1202のアルギニン点変異体MRP1を作成して調べた。その結果この変異体蛋白質はAzidoAG-Aで光標識されないが、LTC4の輸送能とVCRに対する耐性も保たれていた。1202のアルギニンはAzidoAG-Aで光標識による共有結合に重要であることが分かった。

Research Products
(12 results)

All Other

All Publications (12 results)

[Publications] Ren XQ.: "A Positively Charged Amino Acid proximate to C-terminus of TM17 of MRP1 is indispensable for GSH-dependent binding of substrates and for transport of LTC4"Biochemistry. 41. 14132-14140 (2002)
[Publications] Ren XQ.: "Localization of the GSH-dependent photolabling site of an agosterol A analog on human MRP1"British Journal of Pharmacology. (印刷中). (2003)
[Publications] Wang X.: "Breast cancer resistance protein (BCRP/ABCG2) induces cellular resistance to HIV-1 nucleoside reverse transcriptase inhibitors"Mol.Pharmacology. 63. 65-72 (2003)
[Publications] Che X-F.: "Reversal of P-glycoprotein mediated multidrug resistance by newly synthesized 1,4-bensothiazipine derivative, JTV-519"Cancer Lett.. 187. 111-119 (2002)
[Publications] Haraguchi, M.: "Targeted Deletion of both Thymidine Phosphorylase and Uridine Phosphorylase and consequent disorders in mice"Mol.Cell.Biol.. 22. 5212-5221 (2002)
[Publications] Uchimiya H.: "Suppression of thymidin e phosphorylase-mediated angiogenesis and tumor growth by 2-deoxy-L-ribose"Cancer Res.. 62. 2834-2939 (2002)
[Publications] Tsujikawa K.: "Regulation of Lck and Fyn Tyrosine Kinase Activities by Transmembrane Protein Tyrosine Phosphatase Leukocyte Common Antigen-Related Molecule"Mol.Cancer Res.. 1. 155-163 (2002)
[Publications] Ikeda R.: "Molecular basis for the inhibition of hypoxia-induced apoptosis by 2-deoxy-D-ribose"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 291. 806-812 (2003)
[Publications] Ikeda R.: "Thymidine phosphorylase inhibits apoptosis induced cisplatin"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 301. 358-363 (2003)
[Publications] Aoki S.: "Lembehsterols A and B, novel sulfated sterols inhibiting thymidine phosphorylase, from the marine sponge Petrosia strongylata"Chem.Pharm.Bull.. 50. 827-830 (2002)
[Publications] Mukai M.: "Enhanced nucleiotide excision repair in cisplatin resistant human KB carcinoma cells"Oncology Report. 9. 839-844 (2002)
[Publications] Ohno N.: "Augmentation of the cytotoxic activity of an immunotoxin, anti-Tac(Fv)-PE40KDEL, in adutl T leukemia cells"Leukemia Lymphoma. 43. 885-888 (2002)

2002 Fiscal Year Annual Research Report

MRP1トランスポータの薬剤輸送の機構と構造変化の解析

Principal Investigator

古川 龍彦 鹿児島大学, 医学部, 助教授 (40219100)

Research Products

[Publications] Ren XQ.: "A Positively Charged Amino Acid proximate to C-terminus of TM17 of MRP1 is indispensable for GSH-dependent binding of substrates and for transport of LTC4"Biochemistry. 41. 14132-14140 (2002)

[Publications] Ren XQ.: "Localization of the GSH-dependent photolabling site of an agosterol A analog on human MRP1"British Journal of Pharmacology. (印刷中). (2003)

[Publications] Wang X.: "Breast cancer resistance protein (BCRP/ABCG2) induces cellular resistance to HIV-1 nucleoside reverse transcriptase inhibitors"Mol.Pharmacology. 63. 65-72 (2003)

[Publications] Che X-F.: "Reversal of P-glycoprotein mediated multidrug resistance by newly synthesized 1,4-bensothiazipine derivative, JTV-519"Cancer Lett.. 187. 111-119 (2002)

[Publications] Haraguchi, M.: "Targeted Deletion of both Thymidine Phosphorylase and Uridine Phosphorylase and consequent disorders in mice"Mol.Cell.Biol.. 22. 5212-5221 (2002)

[Publications] Uchimiya H.: "Suppression of thymidin e phosphorylase-mediated angiogenesis and tumor growth by 2-deoxy-L-ribose"Cancer Res.. 62. 2834-2939 (2002)

[Publications] Tsujikawa K.: "Regulation of Lck and Fyn Tyrosine Kinase Activities by Transmembrane Protein Tyrosine Phosphatase Leukocyte Common Antigen-Related Molecule"Mol.Cancer Res.. 1. 155-163 (2002)

[Publications] Ikeda R.: "Molecular basis for the inhibition of hypoxia-induced apoptosis by 2-deoxy-D-ribose"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 291. 806-812 (2003)

[Publications] Ikeda R.: "Thymidine phosphorylase inhibits apoptosis induced cisplatin"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 301. 358-363 (2003)

[Publications] Aoki S.: "Lembehsterols A and B, novel sulfated sterols inhibiting thymidine phosphorylase, from the marine sponge Petrosia strongylata"Chem.Pharm.Bull.. 50. 827-830 (2002)

[Publications] Mukai M.: "Enhanced nucleiotide excision repair in cisplatin resistant human KB carcinoma cells"Oncology Report. 9. 839-844 (2002)

[Publications] Ohno N.: "Augmentation of the cytotoxic activity of an immunotoxin, anti-Tac(Fv)-PE40KDEL, in adutl T leukemia cells"Leukemia Lymphoma. 43. 885-888 (2002)

古川龍彦鹿児島大学, 医学部, 助教授 (40219100)