チンパンジーを用いた感染実験によるC型肝炎ウイルス遺伝子配列解析の研究

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14570203
• Research Institution: Nihon University
• Principal Investigator: 杉谷 雅彦 日本大学, 医学部, 助教授 (40187654)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): ALEEMUZZAMAN Sheikh 日本大学, 医学部, 助手 (10277436) ; 森山 光彦 日本大学, 医学部, 助教授 (50191060) ; 阿部 賢治 国立感性症研究所, 感染病理部, 主任研究官 (60130415)
• Keywords: hepatitis C virus / Hypervariable region-1 / HCV cloning / 再感染実験 / chimpanzee / HCV genotype

Research Abstract

C型肝炎ウイルス(HCV)の再感染を起こしたchimpanzee no.34とno.65の接種材料であるchimpanzee no.61の急性期pool血清を用いてクローニングを施行した。本邦で施行したchimpanzee感染実験の最初の接種材料は当時非A非B型肝炎F株といわれていた米国人患者血清に由来するもので、genotype は1aである。HCV genotypeは米国では主に1a型が、日本では1b型がpredominantである事が判明している。HCVの高変異領域であるhypervariable region-1(HVR1)を増幅した。sense及びanti-sense primerとしてHVR1領域近傍に2種類のprimer群を設定して実験を施行した。即ち、HVR1を増幅するprimerとして、genotype 1aに100%相同性を有し、1bに約80%の相同性を有する塩基配列の組み合わせ(実験#1)と、逆に1aに約80%、1bに100%の相同性を有する塩基配列の組み合わせ(実験#2)である。それぞれの組み合わせのprimerを用いてRT-nested PCRを施行、HCV cDNAをvectorに挿入し、transformation、それぞれより10個のクローンを拾い、それらの核酸配列およびアミノ酸配列を決定し、比較検討した。その結果、実験#1では10個のクローンのアミノ酸配列は全て同じ、実験#2では10個のクローンのうち、アミノ酸配列が同じものは、6個、3個、1個の3つのグループに分かれていた。実験1の10個と実験2の6個は同じアミノ酸配列であった。現在更にchimpanzee no.34とno.65の血清を用いてcloningを施行中である。