2003 Fiscal Year Annual Research Report
弱毒リステリアをキャリアとした抗結核菌DNAワクチンの研究
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14570234
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| Research Institution | HAMAMATSU UNIVERSITY SCHOOL OF MEDICINE |
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Principal Investigator |
永田 年 浜松医科大学, 医学部, 助教授 (90275024)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
青枝 大貴 浜松医科大学, 医学部, 助手 (10324344)
内嶋 雅人 浜松医科大学, 医学部, 助手 (20252174)
小出 幸夫 浜松医科大学, 医学部, 教授 (30126809)
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| Keywords | DNAワクチン / 弱毒リステリア / 結核 / Ag85分子 |
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| Research Abstract |
細胞内寄生細菌であるリステリアListeria monocytogenesの弱毒株Δ(デルタ)2をキャリアとした抗結核DNAワクチンを作製し、その免疫誘導効果、感染防御効果をマウスを用いて検討した。ワクチンの標的分子として、BCG菌と結核菌の共通した主要分泌タンパクであるAntigen 85A (Ag85A),Antigen 85B (Ag85B)分子及びそれらと構造的に類似しているMPB/MPT51分子(BCG菌ではMPB51,結核菌ではMPT51)を用いた。平成14年度にこれらの分子をコードしているDNAを用いDNAワクチン、p3L118R-Ag85A,p3L118R-Ag85B, p3L118R-MPB51を作製し、さらにそれらをリステリアΔ2株に導入した。平成15年度はこれらをC57BL/6及びBALB/cマウスに免疫し、その免疫誘導効果、感染防御効果をマウスを用いて検討し、以下のことが明らかとなった。
(1)Δ2/p3L118R-MPB51 (MPB51 DNAワクチン保持弱毒リステリアΔ2株)を、C57BL/6マウスに腹腔免疫、BALB/cマウスに静脈免疫し、DNAワクチンが脾臓、肝臓内に移行しているか否かを、PCRでMPB51 DNAを検出することにより検討した。その結果、臓器細胞内にDNAワクチンが移行していることを確認した。
(2)C57BL/6マウスにΔ2/p3L118R-Ag85A,Δ2/p3L118R-Ag85B,Δ2/p3L118R-MPB51を腹腔免疫することにより、免疫マウスでPPD特異的足蹠腫脹反応を認めた。
(3)免疫C57BL/6マウスから脾細胞を調製し、PPDでin vitro刺激を加えたところ、PPD特異的に細胞増殖、IFN-γ mRNAの発現、IFN-γタンパクの産生を認めた。なお、IL-4,IL-5タンパクの産生も検討したが、有意な量の産生を認めなかった。
(4)BALB/cマウスにこれらの弱毒リステリアキャリアDNAワクチンを投与した後、結核菌H37Rv株(強毒株)を感染させ、10ヶ月後に脾臓、肝臓、肺中の結核菌数を計数したところ、Ag85A,Ag85B,MPB51 DNAワクチン投与群でそれぞれ有意な菌数の減少を認め、これらDNAワクチンの結核菌感染防御能を確認できた。Ag85A,Ag85B DNAワクチンの感染防御能はこれまでに報告されているが、MPB51分子ワクチンの感染防御能は報告がない。本研究により、MPB/MPT51分子がAg85A, Ag85B分子に匹敵する感染防御抗原であることが明らかとなった。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] T.Nagata, T.Aoshi, M.Suzuki, M.Uchijima, Y.Koide: "Induction of antigen-specific T-cell subsets by DNA vaccination"Recent Research Developments in Biophysics & Biochemistry. 3. 89-106 (2003)
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[Publications] T.Nagata, T.Aoshi, M.Uchijima, M.Suzuki, Y.Koide: "Cytotoxic T-Lymphocyte-, and Helper T-Lymphocyte-Oriented DNA Vaccination"DNA and Cell Biology. 23, 2. 93-106 (2004)
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[Publications] K.Miki, T.Nagata, T.Tanaka, Y.-H.Kim, M.Uchijima, N.Ohara, S.Nakamura, M.Okada, Y.Koide: "Induction of Protective Cellular Immunity against Mycobacterium tuberculosis by Recombinant Attenuated Self-Destructing Listeria monocytogenes Strains Harboring Eukaryotic Expression Plasmids for Antigen 85 Complex and MPB/MPT51"Infection and Immunity. 72, 4(in press). (2004)
