酵素反応を阻害する天然及び合成色素成分に関する研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14570397
• Research Institution: Tokyo Medical University
• Principal Investigator: 黒崎 久仁彦 東京医科大学, 医学部, 助教授 (60240701)
• Keywords: DNAタイピング / 酵素阻害 / 染色剤 / 色素成分

Research Abstract

何らかの色素成分が、毛髪や人骨などの法医学的または人類学的試料に混在している場合、通常の精製・除去方法では全くPCR反応が進まず、DNA型分析ができないケースが多いことが知られている。本研究は、これらの色素成分が含まれている試料から確実にDNA型分析を実施する方法を確立することを目的として実施した。
まず、ヘアダイやヘアマニキュアなどの染毛剤処理を施した毛髪からDNAタイピングを行うにあたり、PCR反応を阻害する合成色素成分そのものを精製・除去するべく様々な方法を検討したが、残念ながら有効な除去方法を見出すには至らなかった。しかし、ヘアダイなどの永久染毛剤で処理された毛髪の場合でも、色素が浸透した毛髪皮質の溶解を最小限とする条件でDNAを抽出し、そのDNAをテンプレートとしてPCR増幅を行えば、増幅バンドの検出が可能となることが明らかになった。
次に、古人骨からDNAタイピングを行うにあたり、PCRによるDNA増幅を阻害する埋葬土壌中の天然色素成分に着目し、これらの色素成分による酵素阻害を、できるだけ押さえることができる古人骨DNAの抽出方法について検討した。その結果、我々が独自に考案・改変したシリカパウダーによるDNA抽出法を用いることにより、土壌の色素成分が浸透した古人骨からDNAタイピングが可能となる率を、劇的に高めることに成功した。
本研究の成果により、従来DNA型判定が困難であった、天然または合成色素成分が付着した試料においても、その分析を実施できる可能性が高められたことになり、本研究の法医学的および人類学的意義は非常に大きいものと考えられる。