HAARTの新しい指標-高感度HIV-1プロウイルスDNAとターンオーバーの測定

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14570422
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 吉村 和久 熊本大学, エイズ学研究センター, 助手 (60315306)
• Keywords: HIV-1 / residual replication / turnover / HAART / proviral DNA

Research Abstract

現在HIVの治療の開始を決定もしくは治療レジュメの変更をする際に、最も大きな問題となっているのは、マーカーとして用いられている、CD4陽性細胞数とRNAコピー数だけでは、充分評価ができないということにある。そのため、我々は、nested PCRとreal time PCR法を組み合わせた、高感度のプロウイルスDNA(pDNA)の定量系を確立し(測定限界は、3 copies/μg genomeDNA)、それだけでなくFACSによる末梢血CD4,8陽性T細胞のターンオーバーの測定も合わせて現在経過観察中の症例について行い、従来法では評価できなかった、ウイルスのresidual replicationの程度を評価する試みを行った。その結果、我々が確立したpDNAの測定を行うことにより、HIV RNAの測定よりも鋭敏にウイルスプールの増減の評価が可能となった。そして、従来慢性感染症例ではほとんど減少しないといわれてきたpDNA量が、より強力な治療への変更によって明らかに減少する症例があることもわかってきた。しかも、強化療法を行った症例ではpDNAの減少に伴いそれまで上昇しなかったCD4陽性細胞の数が増加し始めた。このことは、現在の治療で充分ウイルスを抑制できていない(pDNA量の多い)症例でも、治療の変更(強化)により、ウイルスの増殖をより強力に押さえ込む可能性があることを意味している。同時に、末梢血のFACS解析により、CD4,8陽性細胞のKi67陽性細胞の測定を行い、生体内での免疫担当細胞のターンオーバーをモニターした。ウイルスが活発に増殖していると、ターンオーバーが激しくなると考えられており、これまでの約50症例における検索の結果、pDNAとCD4^+数、pDNAとCD4/8比、CD4^+Ki67^+(%)とCD4^+数、そしてCD4^+Ki67^+(%)とCD4/8比の間に有意な相関が認められた。

Research Products

• [Publications] Yoshimura, K: "A Potent Protease Inhibitor (PI) UIC-94003 Interacting with Main Chains of HIV Protease Active Site Amino Acids and the Development of a Novel Mutation A28S in the Protease of UIC-94003-Resistant HIV"J. Virol. 76. 1349-1358 (2002)
• [Publications] Kimura, T: "Reconstitution of spontaneous neutralizing antibody response against autologous HIV-1 in chronically infected patients during highly active antiretroviral therapy"J. Infectious Diseases. 185. 53-60 (2002)
• [Publications] Wang, FX: "Emergence of autologous neutralization-resistant variants from pre existing quasi species during viral-rebound of human immunodeficency virus type-1 infected patients under treatment of highly active anti retroviral therapy (HAART)"J. Infectious Diseases. 185. 608-617 (2002)
• [Publications] Gaatnaga, H: "Amino acid substitutions in gag protein at non-cleavage sited are indispensable for the development of a high multitude of HIV-1 resistance against protease inhibitors"J. Biol. Chem. 277. 5953-5961 (2002)
• [Publications] Maeda, K: "Novel Low Molecular Weight Spirodiketopiperazine Derivatives Potently Inhibit R5 HIV-1 Infection through Their Antagonistic Effects on CCR5"J. Biol. Chem.. 276. 35194-35200 (2001)
• [Publications] Ohrui, H: "Syntheses of 4'-C-Ethynyl-beta-D-arabino-and 4'-C-Ethynyl-2'deoxy-beta-D-ribopentofuranosylpyrimidines and -purines and Evaluation of Their Anti-HIV Activity"J. Med. Chem.. 43. 4516-4525 (2000)