HCV導入肝細胞を用いたラジカル誘導性DNA傷害機構の解明とそれに基づく治療戦略

2003 Fiscal Year Final Research Report Summary

• Project/Area Number: 14570487
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Gastroenterology
• Research Institution: Sapporo Medical University
• Principal Investigator: 加藤 淳二 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (20244345)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 瀧本 理修 札幌医科大学, 医学部, 助手 (10336399) ; 新津 洋司郎 札幌医科大学, 医学部, 教授 (10045502)
• Project Period (FY): 2002 – 2003
• Keywords: HCV / HuH7 / TGF-α / HCV core / reporter assay

Research Abstract

HCV core蛋白は細胞にoxidative stressを引き起こし、NF-kBなどの転写因子を活性化することが報告されているが、その下流の標的遺伝子は不明である。本研究では、genotype 1b型のHCV core蛋白の発現plasmid(pcHCV/core)をヒト肝癌細胞(HuH7)にリポフェクトアミンを用いてトランスフェクションした。G418 selection後、Core蛋白の発現をRT-PCR法ならびにウエスタンブロット法で確認した。HCV core蛋白を発現したHuh7細胞では、IkBのリン酸化・分解を伴った転写因子NF-κBの活性化が観察された。Core蛋白の導入によって、発現が変化した遺伝子群をcDNA microarray法で探索したところ、プロモーター領域にκB配列し増殖に関連する標的遺伝子候補としてTGF-αが見出された。そこで、TGF-αプロモーター領域をLuc遺伝子に連結しトランスフェクションしたところ、Core蛋白の発現量に依存してTGF-α転写が増加することを確認した。またHCV core蛋白を発現したHuh7では、親株に比べて、^3H-thymidineの取り込みが有意に亢進し、その効果はTGF-α抗体処理でキャンセルされた。以上の結果、HCV core蛋白は酸化ストレスを引き起こすとともにNF-κB依存性にオートクリン増殖因子としてTGF-αを産生させる作用があると考えられた。

Research Products

• [Publications] Hisai H, Kato J, et al.: "Increased expression of angiogenin in hepatocellular carcinoma in correlation with tumor vascularity."Clin Cancer Res. 9. 4852-4859 (2003)
• [Publications] Kato J, Sato Y, et al.: "Ethanol induces transforming growth factor-alpha expression in hepatocytes, leading to stimulation of collagen synthesis by hepatic stellate cells."Alc Clin-Exp Med. 27. 58S-63S (2003)