トランスジェニックマウスを用いたRNA結合蛋白質hnRNP B1の肺発癌作用の解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14570555
• Research Institution: 佐賀医科大学
• Principal Investigator: 末岡 榮三朗 佐賀医科大学, 医学部, 講師 (00270603)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 末岡 尚子 佐賀医科大学, 医学部, 講師 (20321846)
• Keywords: hnRNP B1 / 肺がん / RNA結合蛋白質 / トランスジェニックマウス

Research Abstract

(1)目的
heterogeneous nuclear ribonucleoprotein(hnRNP)B1蛋白質はRNAスプライシングやmRNAの核外輸送に関与する核内タンパク質であるが、私共はhnRNP B1の発現が、肺がんの早期から亢進していることを見いだしている本研究はhnRNP B1蛋白質を肺に特異的に過剰発現するトランスジェニックマウスを作成し肺がんの発生に及ぼすhnRNP B1の作用を明らかにする事を目的とする。
(2)方法および結果
肺サーファクタントプロテイン(SPC)遺伝子は、胎生後期から恒常的に肺胞上皮2型細胞特異的に高発現する。このSPC遺伝子のプロモーターとhnRNP B1遺伝子のcDNAを融合させたトランスジェニックマウスを作成した。
1.SPC-hnRNP B1コンストラクトの作成
SPC遺伝子のプロモーターはJA.Whitsett博士より供与していただいた。hnRNP B1およびA2cDNAは肺がん細胞株A549よりクローニングしプラスミドに導入後シークエンスを確認した。また、コントロール遣伝子としてgreen fluorescent protein (GFP)cDNAをSPCプロモーターに結合したコンストラクトを作成した。
2.SPC-hnRNP B1トランスジェニックマウスの作成
得られた3種類のプラスミドをES細胞にinjectionしTGマウスを作成した(中地(放射線影響研究所)米川、多屋(東京都臨床医学総合研究所)との共同研究)。
SPC-hnRNP B1,A2,GFPの導入をPCRで確認できたstrainをそれぞれ15、9,5個体得た。それぞれをTGマウスを作成したB6マウスに交配しF1を得ることができ、今後肺におけるhnRNP B1,A2およびGFPの発現について解析を予定している。

Research Products

• [Publications] Tominaga M, Sueoka N, Irie K, et al.: "Detection and discrimination of preneoplastic and early stages of lung adenocarcinoma using hnRNP B1 combined with the cell cycle-related markers p16, cyclin D1, and Ki-67"Lung Cancer. (in press). (2003)