肺癌における解毒酵素GSTP1の発現調節ならびに抗癌剤感受性についての検討

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14570559
• Research Institution: Yokohama City University
• Principal Investigator: 松瀬 健 横浜市立大学, 医学部附属病院, 教授 (90199795)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 増田 道明 独協医科大学, 医学部, 教授 (80199702) ; 中島 淳 東京大学, 医学部, 助教授 (90188954) ; 伊藤 隆明 横浜市立大学, 医学部, 助教授 (70168392)
• Keywords: 肺癌 / 抗癌剤感受性 / 解毒酵素 / GSTP1 / DNA methylation

Research Abstract

1.肺癌培養細胞株におけるCpG islandのmethylationの解析
肺癌培養細胞のcell line A549を用いてGSTP1の発現状態をWestern blottingなどにて調べ、定常的に強い発現が見られることが確認された。同時に、同細胞からgenomic DNAを抽出、GSTP1のpromotor領域のCpG islandにおけるmethylationの状態をmethylation-specific PCR及びシークエンスにより調べたところ、ほぼmethylationはかかっていない状態にあった。
2.DNMTなどによるCpG islandの人為的なmethylation導入法について
上記1.の結果より、人為的にメチル化をCpG islandに導入することでGSTP1の発現を抑制しうると推測されたため、DNA methylationに関わる酵素であるDNMT-1,3a,3bのクローニングを行っているところである。
3.GSTP1の発現量と抗癌剤感受性との関連
GSTP1の発現量を変化させるため、GSTP1を発現するadenovectorとその発現を抑制するsiRNAを設計し作成、機能の確認をWestern blottingにて行った。
GSTP1の発現量の抗癌剤感受性への効果を検討するため、複数の抗癌剤(camptothecin, cisplatin,5-FU, paclitaxel)によるアポトーシス及びネクローシスの誘導をAnnexin Vと7-AAD、propiodium iodideを指標に、FACScanを用い検討している。