脂肪酸転送酵素CD36のリガンド結合ドメインと機能の組織特異性の研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14570706
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• Principal Investigator: 山口 敦美 財団法人東京都医学研究機構, 東京都臨床医学総合研究所, 研究員 (70124500)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 梅田 真郷 京都大学, 科学研究所, 教授 (10185069)
• Keywords: CD36 / Ros3 / リン脂質 / リン脂質リポソーム / 酸化LDL

Research Abstract

CD36、ROS3の機能ドメインのおよびリン脂質との相互作用を、イーストを用いた蛋白発現系を用いて解析するために、全長、細胞外のCD36、Ros3のHis-tagをつけた組み換えDNA,を作製し、イーストで発現させる系を作った。イーストにおいてCD36、ROS3蛋白質を高発現する系スクリーニングした。発現したCD36、ROS3蛋白質を可溶化し、単一蛋白質に精製した。現在、精製したROS3蛋白質を人工膜中に組み込み、膜中のリン脂質との相互作用の解析を進めている。
Ros3,CD36全長、細胞外、細胞外のN末側半分、C末側半分のcDNA+His-tagを組み込んだベクターを作製し、大腸菌での発現条件検討を行った。Ros3,CD36の全長の発現レベルは低く、なおかつ不溶性画分に発現した。細胞外領域前半、細胞外領域後半は大量発現をすることがわかった。大部分は不溶性画分に発現するが、Ros3細胞外領域後半は可溶画分と不溶画分が約半々くらいに発現した。グアニジン溶液で可溶化してNiカラムに固定し、ゲル上でグアニジンを除いてrefoldingさせて、可溶化したまま溶出させたものでNMRで解析を進めている。

Research Products

• [Publications] Emoto, K., M.Umeda: "Apoptosis by phosphatidylserine in mammalian cells."Subcell Biochem. 19. 61-77 (2002)
• [Publications] Kato, U., et al.: "A novel membrane protein, Ros3p, is required for phospholipid translocation across the plasma membrane in Saccharomyces cerevisiae."J Biol Chem. 277. 37855-37862 (2002)
• [Publications] Yamaji-Hasegawa, A., et al.: "Sphingomyelin-dependent oligomerization of pore-forming toxin lysenin."J Biol Chem. 278. 22762-22770 (2003)
• [Publications] Nakagawa, T., et al.: "Participation of a fusogenic protein, glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase, in nuclear membrane assembly."J Biol Chem. 278. 20395-20404 (2003)
• [Publications] Kametaka, S, et al.: "Identification of phospholipid scramblase 1 as a novel interacting molecule with b-secretase (b-site amyloid precursor protein (APP) cleaving enxyme (BACE))."J Biol Chem. 278. 15239-15245 (2003)
• [Publications] Makino, A., et al.: "Cinnamycin (Ro 09-0198) promotes cell binding and toxicity by inducing transbilayer lipid movement."J Biol Chem. 278. 3204-3209 (2003)