抗腫瘍剤耐性細胞におけるDNA修復酵素および遺伝子の関与

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14570971
• Research Institution: 福井医科大学
• Principal Investigator: 浦崎 芳正 福井医科大学, 医学部, 助手 (10281031)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 上田 孝典 福井医科大学, 医学部, 教授 (40160171)
• Keywords: 白血病 / 薬剤耐性 / DNA修復

Research Abstract

造血器悪性腫瘍は化学療法に反応し治癒が期待できる疾患となっている。その反面再発例や耐性例の存在が重要な問題となっている。これまで我々は各種薬剤耐性細胞を樹立するとともにその耐性機序とその克服について検討を加えてきた。この抗腫瘍化学療法に対する多剤耐性および獲得耐性は臨床的に重要な問題であり、今回我々はDNA損傷の修復遺伝子遺伝子と抗腫瘍剤耐性との関わりを検討している。
まずDNA損傷修復遺伝子遺伝子Ref-1/APEのクローニングをrtPCR法を用いて行った。このDNAをベクターに組み込み、ヒト白血病培養細胞K562にトランスフェクトした。この時蛍光色素蛋白GFPをRef-1に組み合わせた形で過剰発現細胞を樹立した。トランスフェクション後にGFP-ref1融合蛋白がK562の核内におもに発現する事をコンフォーカル顕微鏡で認めた。またウェスタンブロットにて融合蛋白が過剰発現していることも確認した。各種抗腫瘍剤に対する感受性を検討中であるが現在のところ薬剤感受性についての大きな変化は認めていない。また別の白血病細胞細胞株HL60へのトランスフェクトも行ったが細胞内での蛋白発現を認めていない。これはK562と異なりHL60においてはRef-1が細胞毒性を発現した可能性が考えられた。この細胞毒性の消失のためHL60がもたずにK562にのみ発現している蛋白(DNA)のトランスフェクションも計画中である。