2002 Fiscal Year Annual Research Report
EBウイルス感染によるNK細胞の細胞周期および核内構造の変化の検討
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14570997
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
杉本 耕一 順天堂大学, 医学部, 講師 (50281358)
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| Keywords | EBウイルス / NK細胞 / GFP蛋白質 / 多核細胞 / cdc2 / cdc25C / actin / α-tubulin |
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| Research Abstract |
GFPを組み込んだricombinant EBウイルスをヒトNK細胞株および健常人より分離したNK細胞に感染させると、NK細胞株の約30%、ヒト末梢血NK細胞の40-60%においてGFPの発現が認められた。これらの感染細胞は巨大化し、一部の細胞は多核となった。共焦点レーザー顕微鏡を用いた解析でcdc2、cyclin B、cdc25C等のG2/M移行に重要な細胞周期関連蛋白質の発現量の増加と核への移行が観察された。これらの変化に加えてcdc2、cdc25Cの活性化による泳動度の変化がWestern blottingで認められ、細胞がG2/M移行期に存在することが示唆された。更に、flow cytometryによる細胞(周期分布の検討からEBV感染後のG2/M期停止が確認された。一部にDNA量が4Nより多い細胞が認められ、G2/M期停止から逸脱して多核になった感染細胞を示すと考えられた。PML、SC35、HP1等のnuclear dotを形成する蛋白質群の核内分布パターンの変化は明らかではなかったが、GFP陽性の巨大化細胞ではactinおよびα-tubulinによる細胞骨格が著明に変化しており、多核の細胞では中心体の数の異常も認められた。核の構造蛋白質と考えられるlamin A/Cやlamin Bの染色像から多核の一部が、laminを介して繋がっている像も得られた。nocodazoleを用いてEBV感染後のNK細胞をM期で止めると多核の細胞が減少してM期のアポトーシスが多く認められるようになった。以上より、この感染実験の過程において巨大化し多核となった感染細胞では、S期からG2をへてM期に至る細胞周期の制御が破綻していることが予想される。また、EBV感染後の多核細胞の出現は、細胞融合ではなくM期制御の破綻によることが強く示唆された。
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[Publications] 杉本耕一: "Low-dose doxorubicin-induced necrosis in Jurkat cells and its acceleration and conversion to apoptosis by antioxidants"British Journal of Haematology. 118. 229-238 (2002)
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[Publications] 杉本耕一: "More than 13 years-lasting hypereosinophilia associated with clonal CD3-CD4+ lymphocytosis of Th2/Th0-type"International Journal of Hematology. 75. 281-284 (2002)
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[Publications] 玉寄謙治: "CD3-negative, CD20-positive T-cell prolymphocytic leukemia : case report and review of the literature"American Journal of Hematology. 71. 331-335 (2002)
