2002 Fiscal Year Annual Research Report

副腎皮質腫瘍における核内受容体によるホルモン産生異常機構の検討

Research Project

Project/Area Number	14571072
Research Institution	Keio University
Principal Investigator	柴田洋孝慶應義塾大学, 保健管理センター, 専任講師 (20245484)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	栗原勲慶應義塾大学, 医学部, 助手 (90338038)
Keywords	COUP-TF / 核内受容体 / coactivator / corepressor / 副腎皮質
Research Abstract	核内受容体COUP-TFが副腎皮質におけるステロイド産生に重要な役割を果たしていることを現在までに示しており、その分子機構を明らかにするために副腎腫瘍cDNA libraryを用いて、COUP-TFI-interacting Proteinsのスクリーニングを行い、SUMO-1 conjugating enzymeであるUbc9を同定することに成功し、その機能解析を進めた。 1.COUP-TFIとUbc9の蛋白-蛋白相互作用の特異性の検討各種欠失変異体を作製して、Yeast two-hybrid assay, in vitro GST-pulldown assayおよびcoimmunoprecipitation assayを用いて検討したところ、COUP-TFI蛋白質のC末端のamino acids378-423のドメイン(AF2 core)と、Ubc9蛋白質のC末端のamino acids59-158のドメインが相互作用を示すことが明らかとなった。さらに、Ubc9のSUMO-1結合活性を消失させる点突然変異体Cys93Serを作製したところ、COUP-TFIとの相互作用には影響を及ぼさなかった。 2.COUP-TFI転写活性に及ぼすUbc9の影響の検討 COUP-TFI応答性レポーター遺伝子を用いたtransient transfection assaysを行ったところ、COUP-TFIによりnegativeに調節されるレポーターに対してはcorepressorとして、一方、NHE-1,NGFI-AなどCOUP-TFIによりpositiveに調節されるレポーターに対してはcoactivatorとして機能することが明らかとなった。また、これらのcoregulatorとしての機能にSUMO-1結合活性は必要ないことも明らかとなった。 3.COUP-TFIおよびUbc9蛋白質の細胞内局在の検討 EGFP-Ubc9,DsRed-COUP-TFIを作製して、COS-1細胞に発現させて顕微鏡にて解析したところ、COUP-TFI蛋白は核内にdot形成をして局在を認めたが、Ubc9蛋白は細胞質と核内の両方に局在を認め、核内では共存していることが明らかとなった。以上の結果をふまえて、さらにCOUP-TFI, Ubc9による副腎皮質ステロイド産生に及ぼす影響を来年度以降も継続して研究していく予定である。

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Hirotaka Shibata: "Nuclear receptors and coregulators in adrenal tumors"Hormone Research. 59・suppl1. 85-93 (2003)
[Publications] Hirotaka Shibata: "Session Summary : Gene Expression"Endocrine Research. 28巻・4号. 541-544 (2002)
[Publications] Sakiko Kobayashi: "CIP-1 is a novel corepressor for nuclear receptor COUP-TF : a potential negative regulator in adrenal steroidogenesis"Endocrine Research. 28巻・4号. 579 (2002)
[Publications] Isao Kurihara: "A RING finger protein CIP-2 is a novel regulator of COUP-TF action in the adrenal cortex"Endocrine Research. 28巻・4号. 581 (2002)
[Publications] 柴田洋孝: "副腎疾患の診断"Mebio. 19巻・8号. 63-70 (2002)
[Publications] 柴田洋孝: "副腎皮質腫瘍におけるステロイド合成酵素の発現"内分泌糖尿病科. 15巻・3号. 216-223 (2002)
[Publications] 柴田洋孝: "Annual Review内分泌、代謝2003"編集:金澤康徳、武谷雄二、関原久彦、山田信博(中外医学社). 288 (2003)

2002 Fiscal Year Annual Research Report

副腎皮質腫瘍における核内受容体によるホルモン産生異常機構の検討

Principal Investigator

柴田 洋孝 慶應義塾大学, 保健管理センター, 専任講師 (20245484)

Research Products

[Publications] Hirotaka Shibata: "Nuclear receptors and coregulators in adrenal tumors"Hormone Research. 59・suppl1. 85-93 (2003)

[Publications] Hirotaka Shibata: "Session Summary : Gene Expression"Endocrine Research. 28巻・4号. 541-544 (2002)

[Publications] Sakiko Kobayashi: "CIP-1 is a novel corepressor for nuclear receptor COUP-TF : a potential negative regulator in adrenal steroidogenesis"Endocrine Research. 28巻・4号. 579 (2002)

[Publications] Isao Kurihara: "A RING finger protein CIP-2 is a novel regulator of COUP-TF action in the adrenal cortex"Endocrine Research. 28巻・4号. 581 (2002)

[Publications] 柴田 洋孝: "副腎疾患の診断"Mebio. 19巻・8号. 63-70 (2002)

[Publications] 柴田 洋孝: "副腎皮質腫瘍におけるステロイド合成酵素の発現"内分泌糖尿病科. 15巻・3号. 216-223 (2002)

[Publications] 柴田 洋孝: "Annual Review内分泌、代謝2003"編集:金澤康徳、武谷雄二、関原久彦、山田信博(中外医学社). 288 (2003)

柴田洋孝慶應義塾大学, 保健管理センター, 専任講師 (20245484)

[Publications] 柴田洋孝: "副腎疾患の診断"Mebio. 19巻・8号. 63-70 (2002)

[Publications] 柴田洋孝: "副腎皮質腫瘍におけるステロイド合成酵素の発現"内分泌糖尿病科. 15巻・3号. 216-223 (2002)

[Publications] 柴田洋孝: "Annual Review内分泌、代謝2003"編集:金澤康徳、武谷雄二、関原久彦、山田信博(中外医学社). 288 (2003)