2004 Fiscal Year Annual Research Report
乳癌細胞におけるオーファン受容体SXRを介した標的遺伝子の同定
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14571079
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| Research Institution | Okinaka Memorial Institute for Medical Research |
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Principal Investigator |
竹下 章 財団法人 冲中記念成人病研究所, 研究員 (20322646)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小澤 安則 , 財団法人・冲中記念成人病研究所, 研究員 (10124306)
田口 学 , 財団法人・冲中記念成人病研究所, 研究員 (00265141)
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| Keywords | 多剤耐性 / SXR / MDR1 / コリプレッサー / コアクティベーター / ドミナントネガティブ / SRC-1 / SMRT |
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| Research Abstract |
はじめに)癌細胞が多剤耐性を獲得する機序のひとつにMDR1遺伝子の高発現がある。MDR1遺伝子は核内受容体SXRにより発現調節され、パクリタキセルなどの抗癌剤やリファンピシン(RFP)はSXRにリガンドとして結合しMDR1発現を増加する。変異核内受容体には正常受谷の機能を阻害するドミナントネガティブ作用があるが、本研究では1)変異SXRの作成と機能解析、2)癌細胞に変異SXRを過剰発現させ内因性SXRの機能を阻害しMDR1発現が抑制されるかを検討し多剤耐性に対する遺伝子治療の可能性を探る。
方法)434アミノ酸SXRのC端13個を欠失した変異SXR(MUT-SXR)、野生型SXR(WT-SXR)、MDR1プロモーター領域を組み込んだMDR1-TK-LUCレポーターをCV1細胞にトランスフェクトしレポーターアッセイをおこなった。リアルタイムPCRによるMDR1 mRNA測定を乳癌細胞株MCF7細胞と大腸癌細胞株LS174T細胞を用いておこなった。LS174T細胞にMUT-SXRを過剰発現させた安定細胞株を作成した。
結果)レポーターアッセイでRFP刺激によるWTの転写活性化はMUTにより抑制された。このドミナントネガティブ効果の機序を知るため2-ハイブリッド法によりcoactivator(SRC-1)やcorepressor(NCoR,SMRT)とSXRの結合を検討した。SRC-1はWTとRFP依存性に結合したが、MUTとは結合しなかった。一方NCoRやSMRTはWTに比してMUTとより強く結合した。リアルタイムPCRによるMDR1 mRNA定量ではLS174T細胞でMDR1 mRNAがRFP依存性に約5倍増加した(10μM)がMCF7細胞では著変なかった。LS174T細胞にMUT-SXRを過剰発現させた安定細胞株を作成した。現在リアルタイムPCRでMDR1遺伝子発現を検討中である。
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