PPARγと異なる新たな脂肪細胞分化特異的PDE3B遺伝子転写活性化因子の同定

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14571097
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 大澤 春彦 愛媛大学, 医学部, 助教授 (90294800)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大沼 裕 愛媛大学, 医学部, 助手 (00294794) ; 牧野 英一 愛媛大学, 医学部, 教授 (50009578)
• Keywords: PDE3B / プロモーター / 転写因子 / PPARγ / 脂肪細胞 / 分化 / インスリン抵抗性 / 糖尿病

Research Abstract

脂肪細胞ホスホジエステラーゼ3B(PDE3B)はインスリンにより活性化され脂肪分解を抑制し血中遊離脂肪酸(FFA)を低下させる。血中FFA上昇はインスリン抵抗性をきたす。すなわち、PDE3B遺伝子発現を特異的に増強すれば、インスリン抵抗性が改善する可能性がある。本研究では、peroxisome proliferator-activated receptor(PPAR)結合部位を欠くマウスPDE3Bプロモーター領域を用いて、脂肪細胞分化によるPDE3B転写活性化の責任DNAエレメント及びその結合転写因子を同定し、PPARγとは異なる新たなインスリン抵抗性改善剤の標的を見出すことを目的とする。
本年度は、マウスPDE3B5'領域を、2kbから種々の長さに欠失させたルシフェラーゼレポーターコンストラクトを作製した。一方、ヒトPDE3Bプロモーターをクローニングし、解析したが有意なPPAR結合部位を認めなかった。
そこで、ヒトプロモーターも解析した。まず、primer extensionにより転写開始点を決定した。次に、2kbの領域について2型糖尿病24名をPCR直接シークエンスし同定した高頻度のSNPについて、対照200名、2型207名をタイピングした。その結果、5%以上の頻度で同定した-465G>Tと-1727_-1726insTCAATTは完全な連鎖不平衡にあった。-465G>T単独、及び既報の+1389G>Aとによるハプロタイプは2型と関連しなかった。-465T/Tは2型に多い傾向があったが、稀であった。以上より、PDE3B遺伝子のSNPは、日本人2型糖尿病感受性に影響する主要な因子ではないことが想定された。
現在、ヒトPDE3Bプロモーターのルシフェラーゼレポーターも作製中である。マウスとヒトのうち、脂肪細胞分化における活性化が強い方を用いてエレメントを同定する予定である。

Research Products

• [Publications] Osawa, H. et al.: "Systematic search for single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the 5'flanking region of the human phosphodiesierase 3B gene: Absence of evidence for major effects of identified polymorphisms on susceptibility to Japanese type 2 diabetes"Mol Genet Metab. (発売予定). (2003)
• [Publications] Osawa, H. et al.: "Systematic search for single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the FOXC2 gene: The absence of evidence for the association of three frequent SNPs and four common haplotypes with Japanese type 2 diabetes."Diabetes. 52. 562-567 (2003)