2003 Fiscal Year Annual Research Report
HDL新生反応の分子生物学的な解析〜アポリポタンパク質レセプターならびに細胞内情報伝達系の解析〜
| Project/Area Number |
14571104
|
|---|
| Research Institution | Nagoya City University |
|---|
Principal Investigator |
堂前 純子 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 講師 (70227700)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
横山 信治 名古屋市立大学, 大学院・医学研究科, 教授 (10142192)
|
|---|
| Keywords | HDL / コレステロール / ABCA1 / ABCA7 / アポリポタンパク質 |
|---|
| Research Abstract |
細胞コレステロール搬出にかかわるアポリポタンパク質レセプターならびに細胞内情報伝達系の解析のため、主に各種培養細胞を用いた実験を行い、以下の成果を得た。
1)ヒトABCA7遺伝子からは、スプライシングによって2種類(type I, II)のmRNAが産生されること、組織によってこれらの発現パターンには差のあること、type I cDNA由来のタンパク質は主に細胞膜に分布し、アポリポタンパク質依存性HDL新生反応をもたらすのに対し、type II cDNA由来のタンパク質は主に小胞体に分布し、HDL新生に関与しないことを明らかにした。
2)アポAI依存性HDL形成のないヒト由来細胞株293にヒトABCA1-GFPを導入した。GFPの蛍光強度を指標に高発現株を選択し、非常に高いアポAI依存性HDL形成能を持つクローンを得た。
3)ABCA1と高い相同性を持つABCA7(正確にはABCA7 type I)のアポリポタンパク質依存性HDL新生反応に関する機能を調べるため、ヒトABCA7-GFPについて同様に293の高発現株を分離し、これもコレステロールとリン脂質の両方を含むHDLを産生すること、しかし各種薬物への反応性はABCA1-GFP発現細胞と必ずしも一致しないこと等を明らかにした。
4)ヒト線維芽細胞WI38を用い、アポAI刺激によってPKCの活性化の起きること、PKC阻害剤の添加でアポリポタンパク質依存性HDL新生反応が抑制されること等を示した。
5)マウス単球性白血病細胞RAW264を用い、アポAI依存性HDL新生反応の惹起には、脂質を含まないアポAI分子が必要であることを示した。
6)RAW264を用い、カルシウム拮抗薬であるverapamilがアポAI依存性HDL新生反応を増強すること、そのメカニズムは今まで報告されていない経路によるABCA1転写促進であることを明らかにした。
|
-
[Publications] Yuika Ikeda, et al.: "Post-transcriptional regulation of human ABCA7 and its function for the apoA-I-dependent lipid release"Biochem.Biophysi.Res.Commun.. 311. 313-318 (2003)
-
[Publications] Yoshio Yamauchi, et al.: "Apolipoprotein A-I Activates Protein Kinase Cα Signaling to Phosphorylate and Stabilize ATP"J.Biol.Chem.. 278. 27890-47897 (2003)
-
[Publications] Sumiko Abe-Dohmae, et al.: "Human ABCA7 supports apolipoprotein-mediated release of cellular cholesterol and phospholipid to generate HDL"J.Biol.Chem.. 279. 604-611 (2004)
-
[Publications] Kei-ichiro Okuhira, et al.: "Potential involvement of dissociated apoA-I in the ABCA1-dependent cellular lipid"J.Lipid Res.. 45. 645-652 (2004)
-
[Publications] Shogo Suzuki, et al.: "Verapamil Increases the Apolipoprotein-Mediated Release of Cellular Cholesterol by"Arterioscler Thromb Vasc Biol.. (in press). (2004)
