ライボザイムを用いたRET不活化による多発性内分泌腫瘍症2型遺伝子治療の基礎研究

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14571133
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 今井 常夫 名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (80252245)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高橋 雅英 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (40183446) ; 中尾 昭公 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (70167542)
• Keywords: ret遺伝子 / ライボザイム / 遺伝子治療 / アデノウイルス / MEN I型 / MEN II型 / チロシンキナーゼ / 発ガン

Research Abstract

ヒトRet遺伝子のmRNAを特異的に切断するライボザイムを作製した。一つはRetの細胞外ドメインを、もう一つは細胞内ドメインをコードする領域を切断するよう設計した。これらのライボザイムを組み込んだアデノウイルスをRet遺伝子のコドン634の位置に変異を持つヒト甲状腺髄様癌細胞株であるTT細胞に対して感染させた。この感染により、TT細胞内ライボザイムが発現し、Ret遺伝子のmRNAおよび蛋白の発現が有意に抑制された。また、この感染により、TT細胞の増殖が有意に抑制された。これに対してライボザイムを組み込んでいないアデノウィルズの感染ではTT細胞の増殖には有意な影響は見られなかつた。一方、ret-PTCと呼ばれるRet遺伝子の細胞内ドメインと無関係の遺伝子の融合蛋白が甲状腺乳頭癌において検出され、これが発ガンに大きな役割を果たしていることが示唆されている。このret-PTC変異をもつTPC-1細胞に対して、これらのライボザイムを組み込んだアデノウイルスを感染させた。細胞内ドメインを切断するライボザイムを組み込んだアデノウィルスのみこのTPC-1細胞の増殖を抑制したが、細胞外ドメインを切断するライボザイムを組み込んだアデノウイルスは細胞増殖に影響を与えなかった。
以上により、我々が作製したライボザイムを組み込んだアデノウイルスはret遺伝子のmRNAを部位特異的に切断し、mRNA、蛋白の発現、細胞増殖を抑制した。