2002 Fiscal Year Annual Research Report
乳癌におけるヒト内因性物質融合蛋白によるターゲッティング療法の開発
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14571156
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
神野 浩光 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20216261)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
麻賀 創太 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (00327529)
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| Keywords | ECP / EGF / ターゲッティング療法 / 内因性物質 |
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| Research Abstract |
Eosinophil cationic protein(ECP)はRibonuclease(RNase)familyのひとつであり、岡山大学工学部の妹尾昌治博士によりそのヒト型リコンビナント蛋白が作成された。架橋剤であるSPDPと2-iminothiolaneを用いてヒトepidermal growth factor(EGF)とSS結合にて架橋した。EGF-ECP conjugateはEGF receptor過剰発現乳癌細胞株BT-20に対して用量依存性に殺細胞効果を示し、そのIC_<50>は1.5x10^<-7>Mであった。ECP単独投与ではBT-20に対する効果は10^<-6>Mの高濃度でも認められなかった。EGF receptor非発現株であるH69に対しては、conjugateは10^<-6>Mの高濃度でも効果を示さなかった。また、過剰量のEGFを投与することにより、conjugateのBT-20に対する効果は阻害された。さらに細胞株のEGF receptor発現程度とconjugateの殺細胞効果の間に相関関係を認めた。これらのことより、EGF-ECP conjugateの効果はEGF receptorを介していることが示唆された。EGFとRNaseのcDNAをスペーサーを介して結合させたキメラ遺伝子を発現ベクターに組み込み、大腸菌に封入体の形で産生させた。その後、精製し、refoldingを行なった。In vitroではEGF receptor過剰発現株であるA431に対して用量依存性に殺細胞効果を示し、そのIC_<50>は約10^<-8>Mであった。EGF-RNase conjugateはやはりEGF receptor非発現株であるH69に対しては効果を示さなかった。
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