小腸粘膜上皮細胞におけるEGFのシグナル伝達経路の解明

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14571164
• Research Institution: Kansai Medical University
• Principal Investigator: 佐藤 正人 関西医科大学, 医学部, 助手 (30278626)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 奥村 忠芳 関西医科大学, 医学部, 助教授 (80113140) ; 浜田 吉則 関西医科大学, 医学部, 助教授 (00172982)
• Keywords: EGF / small intestine / Nitric oxide / NF-κB

Research Abstract

ラット小腸上皮細胞(IEC6)において上皮成長因子(EGF)は炎症性サイトカイン(IL-1β)の存在下inducible NO synthase(iNOS)の転写レベルに働いて酸化窒素(NO)産生を促進する。また、iNOSプロモーター領域にbindingするNF-κBの核内移行をgel sift assayで解析した結果、IL-1β単独でもNF-κBは核内へ移行するが、EGFの投与がない限りiNOS/iNOS mRNAの産生がおこらない。このEGFのiNOS誘導効果のシグナルを解析すると、EGFレセプターの下流の主にphosphatidylinositol 3-kinase(PI3K)のシグナルが深く関与していることが示唆された。さらにIL-1βのレセプターの増幅にも着目した。EGFによるEGFレセプター、type1 IL-1レセプター(IL-1R1)、IL-1レセプターaccessory proteinの影響をそれぞれのオリゴヌクレオチドを作成し、RTPCRによって検討し、さらにNorthern blot用のプローベを作成し、定量性を高めてNortheen blotを施行した。特にIL-R1でEGFによるレセプターのup regulationが強くみられた。EGFによるIL-1R1 mRNAの増幅はLY294002(PI3K阻害剤)によりiNOSと同様に阻害され、さらに蛋白質レベル(Western blot法)でも増幅されている結果となった。iNOS誘導にIL-1R1の増幅が関与していることが示唆されたがiNOS誘導に必要な核内蛋白質のNF-κBはEGF投与により影響しないこと等から、IL-1R1の増幅は単にIL-1βの効果を増幅するのでなく、EGFレセプターの下流のシグナルに関わっている可能性が示唆された。

Research Products

• [Publications] Kitagawa K, Hamada Y et al.: "Comparison of one-and two-step procedures in a rat model of small bowel transplantation."Transplantation Proceedings. 34・3. 1030-1032 (2002)
• [Publications] Nakai K, Hamada Y et al.: "Reciprocal induction of dipeptide and glucose co-transporters after all ogeneic graft small bowel transplantation."Transplantation Proceedings. 34・3. 1017-1018 (2002)
• [Publications] Kato Y, Hamada Y et al.: "Epidermal growth factor stimulates intestinal adaptation of allogeneic graft after mall bowel transplantation in rats."Life Sciences. 70. 809-819 (2002)
• [Publications] 浜田吉則 他: "栄養-評価と治療"メジカルレビュー社. 112 (2002)