遺伝子変異を標的とした大腸癌微小転移の定量的検出法の開発

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14571222
• Research Institution: Iwate Medical University School of Medicine
• Principal Investigator: 樋口 太郎 岩手医科大学, 医学部, 助手 (40244909)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 前沢 千早 岩手医科大学, 医学部, 講師 (10326647)
• Keywords: MGB / ASO / k-ras / p53 / APC / MRD

Research Abstract

本研究課題では,2年間の研究期間内に大腸癌のリンパ節,門脈血,末梢血中の微小転移をp53,k-ras,APC遺伝子の変異を標的にして定量可能なASO RQ-PCR(allele-specific oligonucleotide real-time quantitative polymerase chain reaction)法を開発することを目的として行われた.
平成15年度分として以下の結果を得た.
(1)MGB(minor groove binder)probeを用いたK-ras遺伝子の定量システムを開発し,論文にした.
(2)MGBを用いた臨床検体での解析では,感度・特異度とも病理学的検査結果と良く相関していた.
(3)リンパ節では,病理学的に発見できなかった微小転移を検出し得た.
(4)MGB ASO RQ-PCR法は,大腸癌ばかりでなく造血器腫瘍の微小残存病変の評価法にも有用であった.
一方,以下の欠点も明らかとなった.
(1)MGB probeはnuclease effectのために,backgroundが強くでる傾向にあった.
(2)ASO strategyはallele-specificな部分が短い場合,backgroundが強くでる傾向にあった.
これらの欠点を解決するために,以下の改良点を考案し,今後は次世代の微小転移定量システムの開発を目指すことにした.
(1)5'MGBは熱に比較的強く,5'MGB probeの開発を目指す.
(2)MGB primerの開発により,特異度の高いASO strategyの開発を目指す.

Research Products

• [Publications] Uchiyama M, Maesawa C, Yashima A, Tarusawa M, Satoh T, Ishida Y, Ito S, Murai K, Enomoto S, Utsugisawa T, Masuda T: "Short consensus probes with 3'-minor groove binder of the immunoglobulin heavy-chain gene for real-time quantitative PCR in B-cell non-Hodgkin lymphomas."Lab invest. 84(in press). (2004)
• [Publications] Itabashi T, Maesawa C, Uchiyama M, Higuchi T, Masuda T: "Quantitative detection of mutant alleles of the K-ras gene with minor groove binder-conjugated fluorogenic DNA probes."Int J Oncol. 24・3. 687-696 (2004)
• [Publications] Ogasawara S, Maesawa C, Yamamoto M, Akiyama Y, Wada K, Fujisawa K, Higuchi T, Tomisawa Y, Sato N, Endo S, Saito K, Masuda T: "Disruption of cell-type-specific methylation at the Maspin gene promoter is frequently involved in undifferentiated thyroid cancers."Oncogene. 23・5. 1117-1124 (2004)
• [Publications] Habano W, Sugai T, Nakamura S, Uesugi N, Higuchi T, Terashima M, Horiuchi S: "Reduced expression and loss of heterozygosity of the SDHD gene in colorectal and gastric cancer."Oncol Rep. 10・5. 1375-1380 (2003)
• [Publications] Uchiyama M, Maesawa C, Yashima A, Itabashi T, Satoh T, Tarusawa M, Endo M, Takahashi Y, Sasaki S, Tsuchiya S, Ishida Y, Masuda T: "Development of immunoglobulin variable heavy chain gene consensus probes with conjugated 3' minor groove binder groups for monitoring minimal residual disease in childhood acute lymphoblastic leukaemia."J Clin Pathol. 56・12. 952-955 (2003)
• [Publications] Uchiyama M, Maesawa C, Yashima A, Tarusawa M, Satoh T, Ishida Y, Ito S, Murai K, Enomoto S, Utsugisawa T, Motoyoshi K, Masuda T: "Development of consensus fluorogenicallY labeled probes of the immunoglobulin heavy-chain gene for detecting minimal residual disease in B-cell non-Hodgkin lymphomas."Cancer Sci. 94・10. 875-885 (2003)